Cultivo in vitro de orquídeas
Agar de los chinos para hacer medio de cultivo casero
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Hola a todos!!
Hoy fui donde los chinos a comprar el "agar" para hacer el medio de cultivo casero, había leido que se llama gelatina vegetal o algo de algas, pero no tienen con ese nombre, lo que me vendieron fue "Dried White Fungus"... que dicen que es igual!
Que es lo siguiente:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](jdv1189444227i.jpg)
voy a hacer la prueba pero quisiera saber si alguien sabe algo al respecto del "white fungus"...
Saludos
Agar o phytamax busco
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qwdfghjkl;lkjhgf
Agar para sembrar semillas?
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Hola
Gracias a que Guinda me regaló este paquete de agar agar lo he conseguido pero no sé que procedimiento seguir para sembrar semillas y si en verdad este agar sirve para realizar la siembra, licuo las algas?
ayúdenme porfavor
gracias y saludos
Agua destilada para cultivo in vitro
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hOLA A TODOS QUISIERA SABER QUE TIPO DE AGUA DESTILADA SE USA PARA EL CULTIVO IN VITRO,FUI A COMPRAR Y ME DIJERO QUE EL AGUA DESTILADA SE USA PARA LOS CARROS Y EN LAS FARMACIAS ME DIJERON QUE EL AGUA DESTILADA ES LA DEXTROSA.HAY ALGUN PERUANO QUE CONOSCA DONDE COMPRAR EL AGUA DESTILADA Y QUE TIPO DE AGUA TENGO QUE COMPRAR.TENGO ALGUNAS SEMILLAS Y QUIERO INTERCAMBIAR.
Alternativas al cultivo in vitro
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Hola a todos
Compre hace poco esta Brassavola y ... oh! sorpresa, venia con este regalito !!
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](jdv1218829327k.jpg)
Ayer compre otra en la calle, ya subire fotos, con dos capsulas.
Queria probar con alguno de los metodos "no in vitro" y me encantaria que aportaran datos, links, experiencias, sugerencias ....
Yo por el momento encontre este articulo
y pensaba probar algo asi. Ambas orquis son del norte argentino e imagino que vendran con micorriza incorporada
Saludos
Ayuda con cultivo in vitro
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hola me gustaria saber si me pueden ayudar para realizar la reproduccion in vitro de una forma facil de entender y caseramente osea barata pus tengo unas capsulas de algunos hibridos que genere y realmente no quisiera perderlas les agareceria infinitamente
GRACIAS
Ayuda con cultivo invitro
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Hola a todos.
El tema es el siguiente. Estuve en Costa Rica y me compre dos orquideas in vitro Esperé a que la plántula midiera 4 cm una vez conseguido, rompí como pude el recipiente de vidrio para no dañar a las plántulas. En el Kit venia un sobre con un poco de musgo sphagno para transplantarlas. Como el cultivo está estéril, pensé en esterilizar las macetas (plastico) que tenía destinadas para las orquídeas. Como la cantidad de musgo era bastante deficiente, en la parte inferior puse turba rubia sin abono pero para evitar que se escapara la turba por los orificios no se me ocurrió otra cosa que ponerle un papel de cocina en la base de la maceta. Al cabo de 3 semanas el papel se había cubierto de mohos. Las plantas parecían estar en perfecto estado hasta ayer que me pareció ver como un polvo blanco cubriendo una raíz y hoy ese polvo blanco cubría parte de musgo y partes de la plántula. He estado navegando por internet y creo que el polvo blanco son OIDIOS. He comprado anti-fungicos y he pulverizado las plátulas pero creo que debería retransplantar sobre corteza de pino con el musgo esphagno esterilizado.
A ver si tengo tiempo y os enseño unas foticos. Muchas gracias de antemano
Ayuda con orquidea in vitro
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Soy principiante en esto de las orquideas in vitro y en septiembre me compre un DENDROBIUM FINDLAYANUM obviamente in vitro, llego el momento de transplantarlo y la verdad que no se como hacerlo.
se que tengo q romper el fesquito y con una pinza esterilizada colocarlo en agua hasta que se le salga el medio de cultivo, vidrios,etc
como me aconsejan romper el frasco y una vez que tengo la orquidea limpia como la coloco en la maceta con el musgo(sphagnum) o sea como la afirmo?
espero que me puedan ayudar, muchas gracias!
Ayuda con orquidea preparada para el Vitro
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Hola a todos los colegas soy Henry de Rep. Dom. y puedo notar muchos tienen mas experiencia que yo en el cultivo en vitro. Yo este viernes k paso realize el sutrato con tomate, le hize un horificio al potesito k luego tape con algodo y luego con papel de aluminio y por encima de este una vanda elastica.
Voy a durar como 5 dias para ver que no este contaminado el sutracto,entonces este viernes que viene voy a proceder a sembrar las semillas.
Ahora bien, yo tengo las semilla que todavia no se me han abierto(osea que por dentro estan esteriles) despues que yo desinfecte la capsulita donde vienen las semillas, las hecho encima del sutracto o las entierro en el sutrato.
realmente no se k hacer necesito una ayudita....
Ayuda in-vitro
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hola foristas, tanto tiempo que no ando por aca.
tengo unas prguntas que agradeceria que me las puedan contestar..
muchas gracias desde ya.
hace un tiempo fecunde las flores de mis phal y obtube dos vainas, y una amiga de un vivero me dijo que me ragalaba la de una laelia que se fecundo por artre de la naturaleza por si sola:
quisiera saber cuando debo cortar las vainas para sacarles las semilla? como me doy cuaneta de que es el momento? quiero aplicar el cultivo para cuando las vainas todavia estan cerradas. voy a aplkicar la mezcla de tomate y banana.
y la otra pregunta es que no consegui vitamina B1. pero lei que se le pueden aplicar suplementos multivitaminicos:
esto es asi? no le hace mal a las semillas que haya otros compuestod como calcio, zinc, magnesio, etc?
muchas gracias...
Cómo hacer laboratorio casero para reproducir orquídeas in vitro
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Saludos a todos.
Antes que nada, una disculpa por duplicar este post (lo puse en el subforo de phal), pero era aqui donde lo queria meter desde el inicio. Bueno, ahora el tema:
Buscando un poco mas de informacion sobre el mejor cuidado de mis orquideas, me encontre esta pagina en internet:
Lo interesante del asunto, es que en una de sus paginas, nos muestra como hacer un laboratorio casero para la reproduccion de orquideas in vitro, en base a semillas y meristemas, para principiantes, paso a paso, y elaboracion de medios de cultivo. Les paso las ligas, ya que esta en dos partes...
Aunque esta en portugues, no es de mucha dificultad su comprension, las palabras o textos que se me traban, utilizo el traductor de babelfish.
Espero que les resulte interesante.... despues veo que mas me encuentro.
Voy a intentar poner una traduccion mas adelante, si es que nadie mas la ha puesto (aun no he terminado de leer todos los posts).
Un saludo
Cómo sembrar y hacer crecer orquídeas in vitro
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Por: Patricia de Ortega
Descubre los secretos del cultivo y la decoración de espacios con Orquídeas.
CEO:
Las orquídeas in Vitro son muy especiales en los tratamientos que requieren para poder crecer y desarrollarse como deseamos que ocurra. El éxito que obtendrás al cultivar este tipo de Orquídeas depende del conocimiento que tengas acerca de los cuidados básicos que necesitan y que definitivamente resultan críticos en su desarrollo.
Las plántulas de orquídeas crecidas in Vitro, reciben el nombre de vitroplantas. La característica que las distingue es el hecho de estar creciendo en un medio totalmente estéril, libre de patógenos y de una forma dependiente de los nutrientes del medio de cultivo donde se desarrollan.
Dado que esto es así…tienes que tener especial cuidado con ellas, una vez están listas para salir de la botella a “la vida realâ€, teniendo que enfrentarse a un sinnúmero de situaciones adversas en las que tendrás que ayudarlas para que logren salir adelante. Recuerda que los hongos, las bacterias y los insectos estarán a la espera de la menor oportunidad.
Veamos cada detalle:
1. ¿Cómo comprar Orquídeas en frascos?
Esto define mucho los resultados que puedas obtener posteriormente. Compra orquídeas en frascos que estén en la etapa de FINALIZACIÓN. Mucho cuidado con esto, a veces pueden venderte frascos que están en estados menos avanzados de desarrollo, que tienen una alta probabilidad de fracaso, porque las orquídeas aún no están listas para crecer por si mismas, les falta raíces y hojas desarrolladas.
2. ¿Cómo extraer las Orquídeas del frasco?
Quiebra el frasco y con mucho cuidado extrae las Orquídeas del interior. En este proceso tienes que tener mucho cuidado en no provocarle ninguna herida a esas plántulas. También puedes usar pinzas largas y delicadas para extraerlas.
Recuerda que tus plántulas de Orquídeas están indefensas, son bebés que se enfrentan por primera vez al mundo, de modo tal que cualquier herida será una fuente perfecta para que entren hongos y bacterias que acabarán con ellas en menos de lo que te imaginas.
3. ¿Cómo tratar a las Orquídeas recién extraídas de un frasco?
Quítales todos los restos de medio de cultivo que tienen adheridos a sus raíces y hojas, escúrrelas y ponlas a secar sobre papel periódico antes de sembrarlas. Para retirar los restos de medio de cultivo es recomendable preparar algún enjuague con bactericida o desinfectante (bien puede ser cloro bastante diluido en agua o algún bactericida como el KILOL). El Kilol es extracto de semillas y corteza de cítricos que puedes encontrar en el mercado bajo otro nombre comercial, lo importante es que son extractos de cítricos con acción bactericida.
4. ¿Cómo las siembro?
Lo que te recomiendo es una especie de bandeja plástica o maceta, en la cual puedas colocar suficiente piedra pómez o carbón vegetal debajo, para que sirva de filtro, y una pequeña cantidad de musgo (peat moss) encima.
Con esta mezcla cumples con dos principios del cultivo de orquídeas bebé:
a) controlar la humedad, férreamente. Para esto es la piedra pómez o el carbón.
b) evitar la resequedad excesiva. Para esto es el musgo o peat moss.
Las mezclas de medio de cultivo a base únicamente de materiales muy húmedos como el coco, el peat moss solo, la corteza de pino o similares, no son recomendables para este tipo de Orquídeas. Retienen mucho la humedad y eso las afecta grandemente.
5. ¿Cómo las alimento?
Pasados los primeros 15 días, aplícales por las hojas una fórmula que tenga más nitrógeno que el resto de los elementos y agrégale un revitalizante de vitaminas.
Coloca abono de lenta liberación en el peat moss, cerca de las raíces (sin colocarlo encima de ellas, podrías quemarlas). Este abono las hará despertar rápidamente.
En ambos casos, tienes que aplicarle dosis mínimas. Para las aplicaciones en las hojas, coloca solamente ¾ de cucharadita del abono por galón de agua (más o menos 1 gramo ó 1 cc por litro de agua). Para las aplicaciones de abono de lenta liberación coloca solo unos pocos granitos, menos de 6, alrededor de tus orquídeas bebés.
6. ¿Cómo las protejo de sus enemigos?
Tus orquídeas bebé son apetitosas para los insectos, las bacterias y los hongos.
Tienes que estar pendiente de:
*Las bacterias: Vendrán por exceso de humedad.
*Los hongos: Vendrán por la misma causa anterior.
*Los insectos: Vendrán a comerse las tiernas hojas y tallos de
tu orquídea bebé.
Necesitas una mezcla de: Un bactericida……Un fungicida…..Un insecticida….y estar pendientes de su aplicación cada semana o según se necesite.
7. ¿Cómo las riego?
Esto será tu prueba de fuego. Este es el momento para saber si has aprendido el concepto del agua en Tus Orquídeas.
Riega siempre en las mañanas, con agua muy fina, nunca chorros. Hazlo solo si las notas mustias y resecas. Podrías espaciar los riegos a tres o cuatro veces por semana, pero manteniéndolas en observación el tiempo que lo necesiten, evitando que lleguen a la sequedad total.
En pocas palabras:
Riega a discreción, espera que tus orquídeas bebés te hablen.=======================================
Hasta este punto, estas preparado para comenzar tus primeros pasos en el cultivo y cuidados de las Orquídeas crecidas in Vitro…Puede que inicialmente te resulte un poco difícil pero poco a poco verás lo fácil y sencillo que se te hace.
Por ahora me despido, espero haber podido ayudarte…
Un saludo,
Patricia G. de Ortega
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Conocer mas de el in vitro de las orquideas
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Un saludo muy especial a todos los foristas, inicio mi laboratorio casero, ,tengo nativas colombianas, y hasta ahora comense con la polinizacion manual, ya les contare de mi resultado,quiero saber si alguno tiene semillas de especies, ¡como un patrocinio¡, ya cuando me salgan las mias tendre para ofreserles, grasias por sus aportes, WILMER SANCHEZ,
Consulta cuidados principiante In-vitro
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Hola a todos y feliz año nuevo!, Les comento que si bien tengo algo de experiencia en el cultivo y cuidado de plantas y soy una apasionado de las mismas, aún no conocía el maravilloso mundo de las orquideas hasta que un buen amigo me ofreció conseguirme un frasco con plantitas cultivadas in vitro. La idea me pareció fantástica, pero no tengo mucha idea de como tratar plantitas in vitro ni de los cuidados generales y especiales de las orquídeas así que sí fueran tan amables de asesorarme en mi incursión en el interesantisimo mundo de las orquídeas estaría mas que agradecido!!!
Para finalizar me ofreció una variedad de especies, ¿cuales me recomiendan para empezar de la siguiente lista? ( 3 o 4 especies por si las moscas!)
DENDROPHALEANOPSIS
ONCIDIUM BIFOLIUM
EPIDENDRUM RADICAM AMARILLO
EPIDENDRUM RADICAM NARANJA
EPIDENDRUM IBAGUENSE NARANJA CON AMARILLO
SOPHRONITIS CERNUA
BLETILLA STRIATA
BRASSAVOLA TUBERCULATA
DENDROBIUM NOBILE
DENDROBIUM TIPO NOBILE
LAELIA PURPURATA
PROSTHECHEA COCLEATA (ORQUIDEA PULPITO)
Desde ya muchisimas gracias por su tiempo y saludos cordiales a todos!!!
Cultivo in vitro
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hola me pueden decir los pasos a seguir para el cultibo en vitro y lo que se nesesita ok gracias por su apollo
Cultivo in vitro
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hola quisiera saber si alguien es tan amable de poder ayudarme llevo un año en el asunto del cultivo in vitro de orquideas y pues no he tenido buenos resultados todo el procedimiento lo llevo a cabo bien pero aun asi los frascos despues de la siembra se contaminan y pues m dijeron q podria ser x la temperatura si alguie puede ayudarme se lo agradeceria
Cultivo in vitro
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hola gente linda, quiero contarles que hice por primera vez mi in vitro, el 28 de junio de 2008, al dia de hoy dentro de los frascos no hay nada de nada....jajjajaj no hay ser extraño alguno, pero tampoco veo protocormos. asi que los mantendre al tanto de como evolucionan los 7 frascos. saludos verbo
Cultivo in vitro
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hola, soy uruguaya y estoy incursionando en el cultivo in vitro de orquídeas. Mi madre tiene un laboratorio (casero) y tiene problemas al transplantar de un frasco al otro. Alguien sabe qué puede estar pasando que las siembras se honguean?
Cultivo in vitro
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[Me gustaria(algun dia no muy lejano) cultivar in vitro una orquidea pero,como se hace y que sustancias necesito? hay alguna especie mas favorable para este tipo de cultivo?
si alguien ha cultivado una me podria compartir su metodologia, sus experiencias/resultados?GRACIAS
Cultivo in vitro
Cultivo in vitro
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Hola a todos ,estuve limpiando las hojas de mis catts cuando me di cuenta de que la vaina de mi cattleya maxima ya estaba abriendo,he visto algunos mensajes de cultivos en vitro pero la verdad me parecen muy dificil.espero que alguien haya intentado el cultivo en vitro un poco mas facil.tengo que guardar las semillas en una bolsa plastica o en una de papel?, espero su ayuda.
Cultivo in vitro
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Hola!!
Quisiera saber si alguien puede responder la siguiente pregunta:
Para esterilizar los tarros in vitro, ¿hay que tapar la olla express?
Y si hay que taparla, ¿no explotan los tarros?
Gracias de antenamo
Cultivo in vitro
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Hola me llamo Rodolfo:
Antes que nada felicidades a todos los que hacen posible este foro de gran ayuda para los amantes de las orquideas soy nuevo en el foro y me gustaria saber como puedo conservar mis semillas de mis orquideas y si me sirven las semillas de las flores secas como las protejo y como tengo que conservarlas.
muchas gracias.
atte.
Rodolfo.
rcharolet123@yahoo.com.mx
Cultivo in vitro de orquídea: ¿es normal? (Foto)
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Hola!
Bueno, he hecho mi primer cultivo in vitro, aunque la verdad me falta agregar semillas jejeje, esta es mi duda, a los frascos con concentrado están en su tercer día, y por lo que he visto no les ha salido hongos, pero tienen como pequeños trocitos por debajo de la superficie, la verdad no creo que sean hongos,[y si es así, a que día aproximadamente se notan?] si no pedazos que quedaron del plátano [ya que use la formula del plátano y el tomate], no use agar, ya que nunca lo pude hallar, pero use grenetina (no recuerdo en que cantidad pero la suficiente para que no quedara en estado liquido), esta es la imagen
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](jdv1373757332a.png)
No pude subirla un poco mas grande ya que el sistema no me la concedía, así que la tuve que reducir mucho, gracias por su ayuda
Psd: son como 15 frascos con distintas cantidades y distintos tipos de frascos
Cultivo in vitro de orquídeas
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Buenas a todos foreros y amantes de las orquídeas, soy nuevo en el foro, pero llevo algunos años con esto del tema de las orquídeas, se que a muchoosss foreros les interesa el tema del cultivo in-vitro. y en el día de hoy les voy a comentar sobre mi proyecto. El año pasado logre polinizar una de mis orquídeas phalaenopsis y afortunadamente logre con exito que se formara una capsula.
después de una larga espera de 5 meses logre que la capsula se madurara y puse en marcha mi primer proyecto del cultivo in-vitro, en el cual de 10 frascos solo logre que dos no se contaminaran, después de unos 2 meses logre tener las primeras plantitas muyyy chiquititas y pensé que seria buena idea hacer un repoteo, en el cual resulto un desastre ya que los nuevos frascos se contaminaron y las plantitas murieron . este año ya tengo una phalaenopsis polinizada con una capsula que le faltan alrededor de 2 meses y otras 2 que están a punto de florear. este año estoy decidido a lograr este proyecto y mostrarlo a todos los foreros interesados.
la idea de este tema que propongo es que las personas interesadas en este tema publiquen sus experiencias y sus errores para el aprendizaje de este tema que es casi un taboo para muchas personas .
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](52d47f8fc1d0b.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](52d47fb07bffd.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](52d47fc4c6f17.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](52d47fdb9dac3.JPG)
Cultivo in vitro de orquídeas
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Hola a todos, no hace mucho que me adentre en este maravilloso mundo de las orquídeas, desde siempre he tenido una pasión ( aunado al hecho de que soy muy obsesivo en cumplir metas) por los organismos productores y los retos; el resultado fueron -LAS ORQUÍDEAS-
Investigue mucho sobre metodos de propagación de estas bellísimas creaciones y encontré en particular un artículo que expone un método de germinación in vitro a bajo costo y con materiales de fácil adquisición y muy buenos resultados, así que si ustedes desean que les proporcione toda la información que tengo haganmelo saber y se las dejaré por acá, esto para que ustedes se animen a hacerlo y no dejemos que estos organismos se extingan por lo que les aconsejo hacerlo con especies endémicas de su región , yo tengo intenciones de intentarlo, pero no se si tendré el tiempo para ello. Un saludo.
Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra
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Hola,
Lo prometido es deuda y aqui van las fotos paso a paso de la preparacion de los frascos que hice en fecha 16/03/2008
Estas primeras son de los ingredientes y pasos de preparacion, utilicé la formula del tomate y la banana:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1207156337p.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](cqs1207156366t.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1207156390f.jpg)
Limpieza de utensilios y resultado del medio una vez mezclados los ingredientes:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1207156426a.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](jdv1207156436r.jpg)
Frasco que no cabía en la olla y quedó sin esterilizar... a día de hoy todavía no tiene signos de contaminación:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1207156468o.jpg)
Olla express usada y presenatción de los frascos en la olla:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1207156492d.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1207156507l.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1207156539s.jpg)
Ya que veo que os ha gustado, pongo unas fotillos de la siembra... pero tened en cuanta que no pude hacer muchas. La calidad tampoco es muy buena...
La siembra es de una capsula de phal hibrida de 5 meses y aproximadamente 15 dias. Por fuera estaba verde, por dentro bastante madura.
Es del dia 23/03/2008
El interior de la caja esta bien limpito con lejia. Los guantes pegados con cinta americana... (una chapucilla...)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1207169833z.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1207169844q.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1207169859j.jpg)
Espero que os gusten, ya pondre una foto de como estan los frascos, aunque esa foto no la he hecho todavia.
Frascos del 23 de marzo 2008 Phalaeonopsis híbrida evolución hasta 01/5/2005 os pongo las fotos aquí también para que no tengais que rebuscar por los mensajes
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](jdv1209632829y.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1209632848h.jpg)
17 mayo 2008:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1211024560e.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](cqs1211024578p.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1211026189i.JPG)
25/5/2008 como ya no me caben los frascos en la cocina he preparado un armario para ellos. Espero que les guste y crezcan bien:
Vista abierto:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1211733234y.JPG)
Vista cerrado:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1211733264x.jpg)
01/06/2008
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](opt1212317984i.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](cqs1212318035p.JPG)
20.06.2008
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1214300817h.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](jdv1214300834p.JPG)
23.07/2008 primeras hojitas
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](cqs1217152162y.jpg)
Un saludo
P.D: Quiero dejar constancia de que es mi PRIMER in vitro, con lo que no pretendo enseñar nada a nadie, tan sólo compartir esta experiencia con vosotros y que nos enriquezcamos todos.
Por eso, todos los consejos son bienvenidos.
Asímismo espero que alguno de vosotros se anime a intentarlo ...
A ver si tengo un minuto y pongo todas las fotos que estan repartidas por el post en este.
Montones de fotos y entradas interesantes relacionadas con las orquídeas.
Cultivo in vitro de plantas casero: mis experiencias
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Hola, ahi van mis últimas experiencias con el cultivo in vitro casero. Con este tema me gustaría aclarar que éstas técnicas no tienen porqué quedar relegadas únicamente a los laboratorios, y animar a todos los que nos encantan la ciencia y las plantas a ponerse con ello. Ahí va..
Material:
-Pinzas
-Bisturí
-Mechero
-Agua destilada
-Lejía
-Botes de cristal o contenedores de polipropileno (PP5)
-pHmetro
-KOH (u otro producto para subir el pH)
-Báscula
-Agar
-Medio de cultivo (MS)
-Reguladores de crecimiento (auxinas y citoquininas)
-Azúcar
-Olla a presión
-Pipeta o jeringa para medir pequeños volúmenes.
-Jarra (para medir volúmenes)
Y lo más importante, una cámara que nos permita trabajar en un ambiente estéril. Hay varias opciones en éste punto:
-Glovebox: Es la opción más barata, por unos 20-40 euros podemos fabricarla, y por un poco más le podemos poner una bombilla UVC para esterilizar superficies
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1249154253d.jpg)
- Flowhood: La construí siguiendo un manual en internet. Sale un poco más cara, ya que cuenta con un filtro HEPA y un extractor adecuado para conseguir un flujo laminar, pero te ofrece una comodidad digna de una cabina de laboratorio.
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](jdv1249154533t.JPG)
Tutorial de construcción:
Medio de cultivo
El medio de cultivo utilizado es el Murashige & Skoog, y para el buen desarrollo de los explantos el pH fue corregido a 5,8 con KOH (durante la esterilización desciende unos 0,3 puntos) se le añadieron 15 g/L de dextrosa y 10 g/l de agar. Además, se le añadió la siguiente concentración hormonal:
-Kinetina (2 mg/l) ------- (Citoquinina)
-AIA (0,2 mg/l) ---------- (Auxina)
La concentración hormonal ideal varía mucho entre especies. Para empezar utilicé una regla habitual para el cultivo de yemas que suele ser usar 10 veces más citoquininas que auxinas. Como el material vegetal era relativamente viejo usé una concentración que me pareció bastante alta de citoquininas (2mg/L).
Esta concentración hormonal favorecerá la proliferación celular y el consiguiente crecimiento de los tejidos. Cuando las yemas hayan crecido lo suficiente, las cambiaré a otro medio con diferente concentración para que enraicen.
Si quisieramos establecer un protocolo para optimizar la micropropagación, habría que probar distintos genotipos y distintas concentraciones hormonales para el mismo medio, y después quedarnos con la mejor.
Material vegetal
- Ramas de potos (Epipremnum aureum)
- Ramas de cáñamo (Cannabis sativa)
Esterilización del medio
El medio de cultivo fue esterilizado en la olla a presión durante 40 minutos desde que se alcanza la máxima presión.
Esterilización del material vegetal
Para esterilizar el material vegetal, seguí las siguientes indicaciones:
-1 minuto sumergidas en alcohol 70%
-10 minutos sumergidas en agua destilada + lejía al 15%
-3 lavados consecutivos de 5 minutos en agua destilada estéril.
Éste es el apartado más delicado, ya que si te pasas con la lejía o el tiempo, los explantos se mueren, y si no llegas no acabas con todos los hongos/bacterias y tus cultivos se contaminan.
Siembra
La siembra de los explantos se realizó en condiciones de esterilidad gracias a al flujo laminar. Sembré explantos con y sin meristemos para observar las distintas respuestas.
Mantenimiento
Fotoperíodo 16/8 con un fluorescente de bajo consumo de 20W.
Cultivo in vitro reemplazar al agar
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Hola a todos.
Alguien sabe si existe alternativas para reemplasar al agar?
Me puse a pensar que derrepente producto pueda servir, o algodon, o vermiculita, o algo que retenga la humedad.
Haber que opinan?
slds
Cultivo in vitro residencia
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HOLA MUCHACH@S, soy BETO de campeche, mexico, es la primera vez que escribo en este foro, el motivo de eso es el siguiente:
soy estudiante de octavo semestre de la carrera de Ingenieria Quimica (de nueve semestre), estoy en tiempo de hacer mi recidencia profesional, un requisito mas para mi titulacion. Entre la opciones de hacer una residencia esta la de un proyecto de investigacion. En mi caso quiero hacer un proyecto sobre el cultivo in vitro de orquideas de manera simbiotica y queria saber quien pueda proporcionarme fuentes de informacion confiables seria de mucha utilidad, he buscado en internet pero como saben no todo lo que se dice en internet es confiable. tal vez manuales de cultivo in vitro ya sea de manera simbotica o no simbiotica, orquideas que serian mas faciles de cultivar, mas rapidaz en crecimiento o cuales no por ser mas dificiles, con algun estudio que ustedes sepan se hayan hecho sobre esto, etc.
Aun no he concretado bien las ideas para desarrollar mi proyecto pero entre lo que tengo en mente es recolectar muestras de micorrizas de orquideas silvestres de mi region, conseguir semillas de orquideas (que aun no se como lo hare), buscar otra forma de colectar micorrizas, tal vez enfocarme a un solo tipo de orquidea o a varias, entre otras ideas que me bienen a la cabeza y que no busco como plastarlas.
se que el cultivo simbiotico de orquideas es un tema algo complicado y que tal vez para los conocedores del tema sea algo descabellante pero es algo que me encantaria hacer por gusto, aparte por requisito de mi escuela y no por imposicion de un proyecto de alguna empresa en la que llegara a ser mi residencia.
espero me puedan ayudar aportando aunque sea pequeño pero se los agradecere muchisimo.
DE ANTEMANO GRACIAS.
Cultivo in vitro y las orquídeas
(Leer más...)
EL CULTIVO IN VITRO Y LAS ORQUÍDEAS.
Por Innan Godínez García.
Único por sus bondades, el cultivo de tejidos vegetales in vitro puede ser la salvación de la extinción de muchas de nuestras especies de orquídeas y no sólo quedarse como herramienta en la propagación masiva de orquídeas de interés comercial.
Está basado en el uso de medios de cultivo ricos (compuestos orgánicos e inorgánicos), fuentes de carbono, vitaminas, aminoácidos, controlando aspectos físicos (temperatura, humedad, pH, fotoperiodo-intensidad lumínica) trabajando en un ambiente asético; utilizando material y medios esterilizados y usando envases estériles también (tubos de ensayo, frascos de vidrio, etc).
Se puede utilizar para obtener plantas libres de virus, la propagación masiva, obtención de clones (individuos genéticamente idénticos) de plantas sobresalientes y germinación asimbiótica de semillas de las orquídeas. Todo esto en un corto plazo.
Germinación de semillas de orquídea.
Las semillas de orquídeas son conocidas como semillas de "polvo" porque son minúsculas y contienen pocas reservas de alimento. No germinan en el medio natural a menos que sean infectadas por un hongo llamado micorriza, el cual abastece a las plantas jóvenes con azúcares y nutrientes que necesitan hasta que son lo suficientemente grandes como para fabricar su propio alimento.
Sin embargo en 1974 knudson conmocionó e impulsó el mundo de las orquídeas, demostrando que las semillas eran capaces de germinar asimbióticamente es decir sin la presencia del hongo micorrízico, in vitro.
Esta germinación se logra gracias a la disponibilidad directa de azúcares, vitaminas, y otros compuestos que tienen las semillas (embrión) en el medio de cultivo para lograr germinar sin necesidad de intermediarios (hongo micorriza).
Cuando la semilla germina produce una masa indiferenciada de células llamada protocorno. Manteniendo las condiciones adecuadas, el protocorno continuará su crecimiento por varias semanas, meses, o incluso años dependiendo de la especie, hasta que alcance la edad apropiada para producir raíces y hojas.
Una vez que la plántula ya posee los órganos apropiados (raices y hojas) para que sobreviva por si sola, se procede a sacarla del envase con medio de cultivo donde germinó para aclimatarla a las condiciones naturales.
Este proceso recibe el nombre de "pase a suelo"; es el más complicado dentro del cultivo in vitro. Sin embargo el secreto está en buscar la combinación adecuada de corteza, fibra de coco, y peatmoss (musgo canadiense) como medio de cultivo además de que la humedad relativa se debe ir bajando poco a poco. Esto en un trnascurso de tiempo no menor a 2 meses. De ese momento en adelante, en cuanto a los cuidados de la planta ustedes son expertos.
Tomado del Boletín Octubre 2006 de la AMO.
Cultivo in vitro: materiales
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hola amigos pienso hacer yo tambien el cultibo en vitro de una phalenopsis pero alguien me puede ayudar dandome la lista de materiales que se ocupa e visto en muchos temas pero como que lo que ponen no me saca de muchas dudas y la informacion no esta muy clara tambien quiero intentar de las dos maneras con vaina madura y verde mi orquidea tiene 2 vainas quisiera probar estos metodos...a y una pregunta mas al cutibo se le puede agregar enraizador (acido indol-3-butirico)este enraisador me funciono muy bien en unas oncidium sp. , tambien abono 17-17-17 creo que ya seria mucho rebolbedero de cosas y gracias por sus respuestas le prometo poner fotos cundo haga el cultivo
Cultivo in vitro: murashige and skoog, solución nutritiva a comprar
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Buenas foreros, estaba interesado en adquirir "murashige and skoog" (solución genérica nutritiva para el cultivo in vitro), ¿alguien sabe donde puedo comprarlo?, y en caso de que hubiera un pedido mínimo, ¿alguien estaría interesado en unirse a la compra?
Tengo entendido que no es muy caro, apenas llega a los 7€ 1L, y creo que se comercializan en cantidades mas pequeñas, pero soy incapaz de encontrar un distribuidor por Internet para MADRID.
Cultivo in vitro: recetario de fórmulas
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Solución de Vitaminas
Cantidadrequerida por Litro
Tiamina 10mg
Biotina 10mg
Piridoxol-HCl 20mg
Solución de micronutrientes
Cantidadrequerida por Litro
H3BO3 1,40g
CuSo4.5H20 0.04g
MnSO4.H20 1.175g
Na2MoO4.2H20 1g
ZnSO4.7H20 1.20g
Solucion de MacroNutrientes
Cantidadrequerida por Litro
CaCl2.2H20 0.02g
Extracto de Levadura 20mg (Complejo de Vit B
FeCl3.6H20 0.01g
K2HPO4 0.2g
KH2PO4 0.6g
MgSO4.7H20 0.2g
Na2MoO4.2H20 0.002g
medio Papa-P
Cantidadrequerida por Litro
Sacarosa 100g
Papa 200g
Agar 17g
Curso de cultivo in vitro casero. 10 y 17 abril en Barcelona
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Hola,por si alguién está interesado los sábados 10 y 17 de Abril, ACAO ha organizado un curso de cultivo In Vitro casero, a cargo de Olivia Vila(Monstera). El temario es el siguiente:
•Introducción al Cultivo In Vitro.
•Elección de método:
-vapor. Descripción método.
-quemador. Descripción método.
-caja estéril. Descripción de la construcción y uso.
•Semillas:
-polinización – compra
•Preparación medio: fórmulas caseras versus comerciales.
•Ingredientes y preparación de la fórmula de "tomate y banana".
. -esterilización de los frascos con horno y olla a presión.
Preparación y esterilización de las semillas:
. -hidratación
. - esterilización
• Siembra en caja estéril
• Conservación de los frascos hasta la germinación
El sábado 10 de abril de 11:30h a 14 h, os esperamos en la CASA ELIZALDE en la calle Valencia, 302,sala CARNER, para ver la parte teórica del curso,El siguiente sábado 17 de de abril de 10 a 14 h, también en la CASA ELIZALDE, sala CARNER, haremos la parte práctica. hay que llevar ropa que se pueda manchar o bata/delantal porque utilizaremos lejía.
El curso es gratuito para los socios de ACAO y para los no socios el precio es de 35€.
Para apuntarse hay que enviar un mail a info@acao.cat. Al finalizar la clase, cada uno se llevará el frasco con las semillas.
Saludos
Lourdes Sió
Presidenta ACAO
Desinfección de herramientas: ¿cómo hacerlo?
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Hola a todos!
Les cuento que soy super meticuloso en eso de la desinfeccion de herramientas, y siempre me higienizo adecuadamente las manos entre manipular una orquidea y otra. No quisiera contaminar a las demas por descuido mio.
La cuestion es que me gusta calentar las herramientas siempre al rojo vivo, pero es mucho menos practico porque siempre tengo que ir a la estufa a hacerlo, o entrar a usar un mechero que tengo, y eso a la larga pone las herramientas feas y las deteriora. No puedo andar con el en el jardin
Que otras formas utilizan ustedes?
Mil gracias companeros
Desinfección: ¿qué usas tu para esterilizar las tijeras?
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Este es un tema que seguro traera mucha tela que cortar ....y quise traerla al foro para compartir todos los diferente metodos de esterilizacion casera para muestras tijeras -cuchillos etc a la hora de una divicion o tranplantar una planta.
El que yo utilizo el fuego !!! las caliento en la cocina antes de cortar cualquier planta y lo repito cada vez que sea necesario segun las veses que este dividiendo !!!!! y el tuyo ????
saludos
Desinfectante natural...
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Hola companeros..
Pues seguro todos hemos escuchado alguna vez esta afirmacion, y me puse a pensar una vez hace tiempo cuando una profesora de microbiologia comentaba: El sol es el mejor desinfectante...
Me puse a leer un poco y encontre incluso metodos de purificacion de agua como el metodo SODIS, en el cual se esteriliza el agua solamente usando la luz solar por efectos de la radiacion que este emite.. Leanlo ustedes mismos
Igual como viricida encontre muchas afirmaciones positivas.
Esto es algo que siempre hago aunque desconozca su efectividad, solo por si acaso, adicional a los metodos tradicionales de desinfeccion (menos las herramientas que las esterilizo al rojo vivo en fuego)
Mi planteamiento es el siguiente:
En macetas por ejemplo.. Que tal si al exponerlas unas semanas a un sol muy intenso todo el dia, como hago por ejemplo en la azotea de mi casa (se expone a sol directo todas las horas del dia, no conozco una planta pequena que pueda aguantar eso)..
No consideran que pueda haber una eliminacion grande de bacterias e incluso virus? Ya que algunos de estos ultimos se inactivan aveces con el simple hecho de estar vagando en el ambiente sin tener un huesped que necesitan..
Seria mucho mas facil por ejemplo lavar bien las macetas que no necesitamos, exponerlas al sol y en el momento que las querramos usar mas adelante ya tenga menos riesgo de enfermar a nuestras orquideas.
Yo por ejemplo he traido pedazos de coco y de helecho arborescente picado como sustrato, y vinieron infestados de hongos de el vivero.. Luego de una semana en mi azotea estan TOTALMENTE libre de hongos y de cualquier crecimiento extrano; secos y se ve mucho mas sano como sustrato. Dudo que quede viable algun hongo, ya que necesitan humedad para crecer.
Solo es una hipotesis.. y perdonen si es algo erronea o no sea conveniente tal idea
Duda con cultivo in vitro
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Encontre esta mescla para cultivar semillas de orquis!!!... Solo que no se si el abono mineral es lo mismo que fertilizante y si no fuera asi al no llegar a conseguirlo con que lo podria sustituir???.
Muchas gracias!!.
Gisela.
Abono mineral 20-20-20 (sin urea) 1 gr
Agar 8 gr
Agua 1 Litro
Azúcar comercial 10 gr
Extracto de levadura 1 gr
Complejo de vitamina B 1 ampolla, vial
Papilla de banana (muy fina) a razón de media banana por litro
La banana como aditivo funciona muy bien (que no esté pasado, los entre verdes y amarillos son ideales).
Duda orquídeas in vitro
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hola
a ver si alguien me puede ayudar
en un envío de una de las orquídeas in vitro de el contenido llegó muy revuelto. Ahora me han enseñado cómo está y, a pesar de que el sustrato se ha asentado más o menos, las plantitas están llenas de esta gelatina y algunas hojitas están marrones. La duda es si será mejor esperar y actuar como indican las instrucciones o sacarlas antes de tiempo ante el riesgo de que se estropeen. Quien la tiene dice que tal vez sería mejor limpiar un poco el contenido, las hojas estropeadas y volver a colocarlo dentro. ¿Alguna sugerencia?
gracias!!!!
Duda urgente sobre consistencia del agar con agua
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Resulta que tengo dos capsulas de miltonia espectavilis var moreliana para cultivar dentro de unos dias y queria saber si sabrias aproximadamente cuantos gramos de agar necesitaria y con cuanta cantidad de agua fria lo tendria que diluir ... osea como seria la consistencia a la que tendria que quedar?
Las quiero cultivar con las capsulas todabia verdes (al 60% de su madures) solo que me gustaria colocarlas con algo de liquido ( que no se con que materiales y cuanta cantidad prepararlo )
Ya que quiero colocar las semillas dentro de el frasco inclinado con un poco de liquido para que al colocarlo nuevamente en su postura normal las semillas se deslicen por el medio de cultivo y se siembren solas bien esparciditas!!!.
Espero muy agradecida sus respuestas y consejos!!!.
Dudas sobre germinación in vitro
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Hola a todos
Soy Henry de Rep Dom. Estoy por hacer la cultivacion en vitro y quiero saber si los colegas del foro de orquideas podrian ayudar a aclarar pal de dudas, y a ver quienes an germinado en vitro.
El problema es el siguiente.
voy hacer el cultivo con la furmula del tomate ya que es la mejor y mas facil ya que esa tiene el PH controlado, pero el problema es que tengo que echarle Tiamina que lo mismo que complejo B1, pero aqui en Rep. Dom. encuentor unas pastillas que son lo mas sercanas a esas me informaron en una farmacia que contienen B1,B6yB12 quisiera saber si no importa que le coloque la cantidad indicada al cultivo de esa..
Ayudenme
El riesgo de contaminación depués del sembrado in vitro
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Hola, tengo una inquietud acerca de la alerta roja de contaminación después de haber sembrado las semillas. Me parece haber leído en el foro, creo en un tema de Patricia74, que después del sembrado habría que vaporizar los frascos con clorox o lejía para evitar que se contaminen las semillas. Ahora mi pregunta es, hasta que etapa hay que temer al riesgo de contaminación? Hasta que germinen las semillas? Hay una etapa en que los frasco, realmente , quedan libres de contaminación?
Me gustaría leer las opiniones de todos, pero sobre todo de los que ya han experimentado exitosamente y a los que le ha fallado.
Gracias anticipada.
Elementos para el medio de cultivo
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Hola a todos, quiero saber si el agua esteril es lo mismo que el agua destilada.grasias.
Esterilizacion de medio de cultivo in vitro
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hola a todos, siempre he leído este foro aunque es la primera vez que participo, les quería contar acerca de mi experiencia en la esterilización de los frascos de medio de cultivo sin tener que usar la olla a presión (la que tengo en casa es muy chica). Lo que hice fue probar dos formas diferentes una en horno convencional y la otra con el microondas.
horno convencional:
-llené 2 frascos de vidrio de gatorade y coloqué medio de cultivo en el horno precalentado a 150-180 °C, y los dejé por 25 minutos.
-dejé enfriar un poco y luego los trasladé a mi cámara estéril que previamente desinfecté con fluorescente UV 60 min. y posteriormente con lejía comercial al 20%, 10 min. antes de trasladar los frascos.
-dentro de la cámara también coloqué bolsitas de polipropileno previamente esterilizadas en mi olla a presión (por ser compactas si entraban en mi olla de 6 litros); estas bolsitas de 6x10 pulgadas las usaré para colocar el medio de cultivo. Las bolsitas se esterilizan envolviendolas todas juntas con papel aluminio.
-una vez que trasladé el medio de cultivo, abrí con cuidado los frascos quitandoles el aluminio que tenían como tapa, y comencé a traspasar a las bolsitas que luego cerré doblando en tres la parte abierta y colocándoles un clip para que lo sujete y no se vuelva a abrir, para mayor seguridad luego las pegué con cinta adhesiva para asegurarme que no ingrese aire contaminado.
horno microondas:
- coloqué en frascos de gatorade (vidrio) mas o menos 1.5 centímetros de medio de cultivo, a cada frasco le añadí 1 piedra pomez (mas o menos de 4 a 5 mm), pues según he leído estas evitan que el medio explote (se rebalse) al intentar retirarlos del microondas.
- Como prueba coloqué 3 de estos frascos y los puse por 5 minutos y gradué el microondas a una ptencia de salida de mas o menos 500 watts.
Resultados:
Han pasado 10 días después de la esterilización y las 8 bolsitas de polipropileno y los 3 frascos esterilizados no se han contaminado.
Espero que les sirva de algo mi experiencia.
ranchu
Esterilizacion del aire con ozono (gas): ¿se puede esterilizar aire cultivo in vitro?
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El ozono (gas) se usa para eliminar virus,bacterias y hongos del agua. La pregunta es si se puede usar para esterilizar aire y poder crear un ambiente esteril a la hora de hacer cultivo in vitro. Se pueden esterilizar medios de cultivo y utensilios tambien?
Es que tengo un generador de ozono y me gustaria saber como lo podria aprovechar en el cultivo in vitro y esquejes.
Agradeceria informacion sobre el tema.
Salu2
Fecundacion In Vitro
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Hola, lo que iso que entrara en el tema de las orquideas es la idea de la fecundacion in vitro
luego de tener las plantas intente fecundar diferentes flores y aqui estan los resultados
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1267082832u.JPG)
(madre)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](jdv1267083678y.JPG)
(padre)(perdonen que la foto este tan acercada pero fue lo unico que pude hacer para que llegara a 200kb
Y estos son los resultados:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](opt1267083850k.JPG)
donde puse el polen se cerro y se esta inchando
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](opt1267083914t.JPG)
el tallo se esta agrandando
Otra flor
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](cqs1267084027o.JPG)
(padre)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1267084060a.JPG)
(madre)
Y estos son los resultados:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1267084251r.JPG)
La flor madre se seco y el tallo esta agrandandose
Ps todos estos intentos de fecundacion los ise el 17 de febrero del 2010
Haora nesesito ayuda para saber:
cuando debo cortar la capsula de semillas
que formula para germinar las semillas debo de usar
NO SE NADA DE COMO GERMINAR LAS SEMILLA NESESITO QUE ME DIGAN TODO LO QUE DEVO DE ACER PASO A PASO GRACIAS
Fórmulas para el medio de cultivo de semillas de orquídeas
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Navegando por internet, he encontrado esto, que creo que es interesante... Está escrito por un tal Jorge Alejandro Paulete Scaglia. Espero que no le moleste que lo ponga aquí. Son distintas fórmulas para hacer el medio de cultivo para hacer germinar las semillas de orquídeas.
Fórmula de Knudson "C"
1.000 g de Nitrato de Calcio
0.250 g de Fosfato monopotásico
0.250 g de Sulfato de Magnesio
0.500 g de Sulfato de Amonio
0.025 g de Sulfato de Hierro
0.0075 g de Sulfato de Manganeso
20.00 g de azúcar
10.00 g de agar-agar
1 litro de agua destilada (agua sin cloro)
El pH debe estar alrededor de 4.8 - 5.0.
Fórmula del plátano
100.00 g de plátano maduro hecho puré o licuado
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
900 ml de agua destilada
Fórmula del Tomate
250.00 g de tomate bien maduro y sanos. Hacer una pasta y colar en colador bien fino.
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
900 ml de agua destilada
Fórmula de la piña
200 ml de jugo de piña dulce y maduro
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
800 ml de agua destilada
Fórmula del Tomate con Zanahoria
100.00 ml de zumo de zanahoria
100.00 ml de zumo de tomate
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
800 ml de agua destilada
Fórmula del Tomate con Banana
40 g de banana hecha puré o licuada
100.00 ml de zumo de tomate
10.00 g de agar-agar
20.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
900 ml de agua destilada
Fórmula del Profesor Burgeff
1.000 g de Nitrato de Calcio
0.250 g de Sulfato de Amonio
0.250 g de Sulfato de Magnesio
0.020 g de Sulfato de Hierro
0.250 g de Fosfato bipotásico
0.250 g de Fosfato monopotásico
20.00 g de azúcar o miel de abejas
12.00 g de agar-agar
1 litro de agua destilada (agua sin cloro)
Fórmula de La Garde
1.00 g de Sulfato de magnesio
1.00 g de Nitrato de Calcio
1.00 g de Fosfato monopotásico
1.00 g de Clorato de Calcio
0.50 g de Nitrato de Amonio
0.50 g de Carbonato de Amonio
0.05 g de Fosfato de Hierro
20.00 g de azúcar
12.00 g de agar-agar
1 litro de agua destilada (agua sin cloro)
Fórmula usada en Hawai
1 1/2 cucharada de té de emulsión de pescado
1 cucharada de té de peptona
12 g de agar-agar
20 g de azúcar
1 litro de agua destilada
Fórmula más Casera
3 cc de abono DynaGro 7-9-5 o 10-5-5
12.00 g de agar-agar
20.00 g de azúcar
2.000 g de carbón vegetal o carbón activado
5 tomates pera sin semillas (aquellos bien chiquitos)
150.00 ml de agua de coco
40.00 g de banana (mas o menos media banana)
800 ml de agua destilada
Nota: En las fórmulas con Tiamina, los comprimidos de vitamina B1 (conocido normalmente por Benerva) puede ser substituido por complejos polivitamínicos Teragram M o Supradyn.
En todos los casos con gelatina, primero se pesan y se dejan preparados los compuestos químicos con las cantidades correctas. Después se pone el agua destilada adentro de una olla de vidrio, esmaltada o revestida de teflón a calentar. Cuando está a punto de hervir (pero sin que esto ocurra) se colocan todos los componentes adentro y se mezcla utilizando una cuchara de madera o de plástico. Se revuelve un poco para que se disuelvan todos los productos, se apaga el fuego y se reparte el preparado en los frascos.
Cada frasco debe recibir en el fondo una cantidad de preparado de aproximadamente 1 centímetro (50 ml). Por cada litro de agua se preparan poco mas o menos 20 frascos. Se tapan los frascos y se prosigue con la esterilización.
Todas la fórmulas funcionan bien siempre que pH se encuentre dentro de la faja ácida de 4.8 a 5.0, no olvidar de medirlo siempre con la mezcla caliente. Nota: Las fórmulas con tomate ya tienen el pH adecuado. Una de las fórmulas más usadas es la de tomate con plátano.
Fórmulas para la siembra de orquídeas in vitro
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hola a todos
tengo cápsulas de phal en formación y quisiera que me ayudaran escribiendo algunas recetas para germinarlas.
por favor, es que ya casi se maduran ,
:
Fotos de cultivo in-vitro
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HOLA, AQUI LES PONGO FOTOS DEL LABORATORIO DE UN AMIGO DONDE TENGO LA DICHA DE PODER SEMBRAR MIS CAPSULAS DE ORQUIS. ESTUBE DE VISITA POR ALLA Y TOME ALGUNAS FOTOS PARA COMPARTIRLA CON TOOS USTEDES, ESPERO K LES GUSTE...
SALUDOS,
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1230566411q.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1230566468t.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](rgh1230566528d.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1230566563u.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](opt1230566600a.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](cqs1230566648l.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1230566733w.JPG)
Fotos de visita a laboratorio donde producen orquídeas en Valencia
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Hola a todos esta tarde algunos miembros de la oval nos hemos ido a hacer una visita a un laboratorio donde producen varios tipos de plantas entre ellos las orquideas y es BRUTAL la cantidad de plantas que sacan.Para que os hagais una idea lo que nos cuesta a nosotros con nuestros botecitos un par de años ellos lo consiguen en unos meses´
bueno empiezo a poner las foticos
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](rgh1202507623c.JPG)
en estas fotos se ve donde hacen germinar a las plantas esto es mas o menos lo tipico con agara agar
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1202507748i.JPG)
como veis se ve que hay una gran cantidad de plantas.
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1202507823n.JPG)
una vez que las plantas ya han cogido el tamaño deseado lo pasan a los botes de crecimiento.Y ahora es cuando viene lo novedoso del tema ,las siguientes fotos son todas de los mismos botes,los botes son de cuatro litros
cada cultivo tiene dos botes uno con el medio de cultivo y el otro con las pequeñas plantas
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1202508145d.JPG)
cada X tiempo el ordenador da una orden y introducen el medio de cultivo a las plantas
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1202508303v.JPG)
y cuando esta el medio de cultivo con las plantulas introducen aire esterilizado,aunque en la foto no se ve el agua esta burbujeando,y despues de unos minutos retiran el medio de cultivo,al estar las plantas aireadas y poder cambiar el medio o tratar en caso de hongos las plantas van a la carrera.
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1202508721n.JPG)
en las fotos solo se ven unos botes pero hay bastantes.
ah no lo he dicho pero son dendrobiums y phalapnosis ¿cuantas plantitas habran por bote?
Bueno espero que os alla gustado y que sepais aunque un poco por encima como nacen nuestras plantitas
Germinación en gelatina: ¿qué tipo de gelatina?
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hola a todos!!! he oido de la germinacion en gelatina! pero no se si es gelatina comercial de reposteria o alguna especifica para germinacion! alguien experto en este tema me podria aclarar la duda? y si me pueden facilitar informacion de como se realiza dicho proceso en la germinacon para orquideas!! gracias a todos!!!
Habitación-armario para in vitro
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Hola a todos,
Como me había quedado sin espacio en el armario de los frascos y la situación era insostenible en la cocina... he recuperado un espacio que no usaba y estoy ampliandolo (ampliandolo varios metros... )
Aquí va la primera foto, después de quitar trastos.. telas de araña, darle una primera mano de pintura y poner un par de estanterias.
Aun le falta mucho, pero... se hace lo que se puede
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1225050824d.jpg)
Creo que este va a tardar en estar lleno
Olivia
Hongos en orquídea invitro
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Hola a todos, tengo un bote de babys y se me estan pudriendo,
Que ungicida les puedo echar y donde lo puedo comprar?
Hoy en televisión orquídeas in vitro en TV3 con monstera
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Perdonad que os avise con tan poco tiempo pero hoy a las 20:30 en TV3podremos ver Cypripedium calceolus y a Olivia- Monstera mostrando como hace reproducción in vitro en su casa.
Podeis seguirlo por internet en este enlace:
Saludos
Lourdes
In vitro
(Leer más...)
Hace aprox 3 años, en Xcaret (Mexico) adquiri estas orquideas "in vitro"
Quisiera saber que debo hacer pues no noto crecimiento alguno y sí que algunas hojas, pareciera, se estan secando
Alguien tiene experiencia en esto??:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1188340937d.JPG)
IMG]https://imagenes.infojardin.com/updown/images/viu1188341130i.JPG
In vitro a modo de prueba
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proximamente enviare al foro las experiencias que hicimos IN VITRO Elena Mari y yo con el resultado de tres frascos que han germinado.
el 23 de octubre del año 2007 , ella yo nos juntamos para preparar la formula para germinar las semillas de orquideas, lamentablemente , de este preceso no tenemos fotos , pero haremos el paso a paso
5 tomates chicos, sin semillas
1/2 banana
20 grs. de azucar
esto lo licuamos
calentamos el agua destilada
In vitro fallido, pero no todo esta perdido...
(Leer más...)
Hola mis amigos pues por aqui ando otra vez esta vez para contarles que me pasado proyecto In-vitro termino en fracaso total... estoy un poco frustada pero seguire intentandolo por lo pronto e; pasado sabado abri otra demis capsulas y lo hize de nuevo ya he perdido 5 frascos de 11 por contaminacion pero tengo 6 esperanzas mas espero almenos conseguir un frasco, en fin y por otro lado dejenme les comento que durante las ultimas semanas y buscando en la web encontre una persona aqui en Canada la cual se ha dedicado por mas de 23 años a la propagacion de orquideas pero ahora se va ha retirar y por dicha razon hizo una venta final de todos sus frascos de propagacion entre los cuales estaban DENDROS, CATTLEYAS etc. y yo por ser una de las ultimas personas en la lista adquiri 2 flask o frascos con plantones a muy buen precio y el muy amable me mando algunos de pilon como decimos los mexicanos por lo cual me encuantro muy feliz ya que ahora tengo 116 nuavas hijas 3 clases de cattleyas y un dend. leonis. pero sin mas les presento mi nuevo habitad el cual acondicione con un calentador y fluorecentes por lo cual tienen la temperatura y humedad perfectas para poder crecer sanas y hermosas 24 grados centrigrados y humedad del 60% aqui les pongo unas fotitos y ya les contare como van progresando.
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](rgh1250917818i.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](opt1250917862a.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1250917885s.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1250917906k.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1250917930v.JPG)
In vitro y esterilizacion
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Hola,
Yo sigo R que R con el tema del in vitro.
Ahí va mi planteamiento,
Estoy como loca recopilando frascos de lo más variopinto para usarlos como frascos madre.
Luego tendré que esterlizarlos y intentar no hacer un estropicio en la cocina. No tengo nada claro lo de meter los botes en el horno... más que nada NO TENGO HORNO
Y claro una vez conseguido habrá que esperar que el proceso haya sido el correcto y no se contaminen.
Y ahí va la pregunta:
No se puede usar frascos esterilizados, de esos de uso sanitario? abrirlos en una caja esteril y introducir el medio?
No se podría esterilizar los potes con el metodo milton o algo así?
En esos casos habría que tratar el medio de alguna manera especial? Ya que en algunas técnicas ponen los potes con el medio en la olla a presion, pero en otras simplemente vierten el medio en los potes esterilizados en la camara de flujo laminar y luego cierran sin calentar otra vez....
No se he conseguido explicarme muy bien, alguien lo ha probado o algo parecido?
Espero ansiosa que alguien me responda,
Monstera
In vitro y otros
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Navegando por Internet encontré una pagina muy interesante sobre la reproduccion de las orquideas por vara floral y por invitro. Muchas cosas estan ya en este foro, pero hay cosas que no.
Os dejo la pagina:
En esta pagina, para reproducir las orquideas por vara floral (tipo phal) usan dos metodos, el primero es el de cortar la vara en trozitos y clavarlos al sustrato ( el más usado por los aficionados) y el otro es hacer lo casi lo mismo pero invitro, con camara esteril y todo eso...
Tambien te explica como reproducir las orquideas invitro por semillas, usando dos metodos: germinacion en medio y germinacion en corteza.
Para los casos invitro en medio, usan medios fabricados que venden aquí:
Medio para multiplicacion invitro vara floral: Sigma-P6793
Medio para germinar semillas invitro: Sigma-P6668
Medio para replantar las seedlings: Sigma-P1056 (sin agar-agar)
En la pagina que he dado al principio, tambien venden seedlings.
Espero que os ayude!
Saludos
In vitro: 1 - Preparacion del medio de cultivo
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Buenas a todo el mundo!!
Aunque este sea mi primer mensaje en este foro, no quiere decir que no haga tiempo que este por aqui...no suelo postear mucho...pero lo que subo, intento que sea decente...
Ayer por la tarde se me ocurrio que podria preparar medio de cultivo, y lo hice!, aunque fue mi primera vez, ahora estoy esperando respuestas negativas sobre contaminaciones, si no es asi...pronto subire la parte 2, sembrado de semillas en el medio.
Voy a explicar el procedimiento que hize yo...parece complicado pero es muy simple, la otra cosa es que no se te contamine...
Antes de empezar decir que utilize la fórmula del plátano:
-100g. de plátano licuado (pasado por la turmix)
-10g. de Agar Agar, (son unas algas marinas, que se utilizan para la comida (normalmente los chinos), disponibles en cualquier tienda normal de dietetica o productos naturales) "Natur house".
-15g. de Azúcar
-4 comprimidos (de 300mg) de vitamina B1 (supradyn, benerva...) disponibles en farmacia.
-y por último 900ml de agua destilada. (disponible en supermercados a 1€ los 5 litos...muy barata!!)
En cuanto a material necesario para la preparacion:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](opt1234976745r.JPG)
-Horno
-Olla
-Cuchara de madera o plástico
-Embudo de vidrio
-Potes de cristal atornillables, tubos de ensayo...
-toallas de papel
-Papel de aluminio
-Balanza
Unas fotos de el agar-agar para que veais como es, y la vitamina B1 (compuesto de tiamina):
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](arx1234976606e.JPG)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1234976861g.JPG)
Antes de empezar tenemos que limpar bien todos los frascos donde vamos a verter el medio. (se puede limpiar con ethanol, lejia, alcochol...) y lo colocaremos sobre las servilletas de papel.
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](rgh1234977267v.JPG)
Pasos a seguir:
1-Mezclar los productos del medio de cultivo (previamente citados), quedara una cosa asi:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1234976968o.JPG)
Despues has que pasarlos por la turmix, para que no se queden grumos, y seguidamente por un colador fino para evitar impurezas.
2-Ponemos el agua destilada a calentar (900ml) en la olla.
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1234977115s.JPG)
3-Seguidamente encendemos el horno a 150 ºC
4-Antes de que empieze a hervir el agua, apagamos el fuego i vertemos los componentes (ya pasados por el colador)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](opt1234977380x.JPG)
5-Mezclar bien el agua con el medio, (usar cuchara de madera o plástico.)
6-Una vez mezclado bien, pondremos el medio en una jarra (previamente limpia) y distribuiremos el medio de cultivo en los frascos mediante el embudo de vidrio, pondremos aproximadamente 1cm de medio por pote.
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](rgh1234977733b.JPG)
7-Tapamos los potes dejando la tapa un poco floja, para que no nos exploten los frascos dentro del horno. En los tubos de ensayo utilizaremos tapones de algodon, que impiden que pasen las bacterias.
8-Cubriremos los frascos con 2 capas de papel de aluminio.
9-Colocaremos los potes en el horno, previamente encendido, mucho cuidado en quemaros, ya que lo hemos tenido un buen rato encendido a una temperatura bastante elevada (usar guantes termicos).
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1234977644o.JPG)
10-Despues de unos 30 minutos, apagaremos el horno y dejaremos enfriar toda la noche dentro de el. A la mañana siguiente, con mucho cuidado apretaremos las tapas flojas y le pondremos una banda elastica de sujecion (colerteros, gomas de plástico, etc...)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](opt1234977870l.JPG)
Como podeis ver, ya esta frio, y el liquido a pasado a ser gelatina:
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1234977985d.JPG)
Una vez los tengamos todos, solo falta guardarlos en un sitio bien luminoso (sin sol directo) y a una temperatura de 20 ºC mas o menos.
Y a esperar si hay inicios de contaminaciones, si en 2 o 3 semanas no ha aparecido nada, podemos proceder a plantar nuestras plantitas...aunque no quiere decir que ya este libre de contaminaciones...
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1234978105g.JPG)
NOTA:
Con este "tutorial" no intento que hagais lo mismo que yo, ya que esta e smi primera vez, y no se si sera fiable, aunque por ahora no hay indicios de contaminaciones ni nada por el estilo, simplemente lo cuelgo para aquella gente que quiera saber un poco mas en esta vida...
Muchas gracias a todos y espero que os haya gustado...ahora a probar vosotros!!!!!
Saludos,
Carlos.
In vitro?
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Ya entendi como hacer todo el procedimiento pero me quede con una duda ¿Que se le hace a las semillas para esterilizarlas antes de meterlas a los frascos?
In vitro?
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HOLA A TOD@S , HE ESTADO ECHANDO UN VISTAZO POR EL FORO POR EL TEMA DE POLINIZACION Y LA CONSECUENTE REPRODUCCION IN VITRO Y HE LEIDO QUE TAMBIEN SE PUEDE REALIZAR A PARTIR DE CIERTAS PARTES DE TEJIDO DE LA PLANTA PERO NO HE ENCONTRADO EXPLICACION MAS AMPLIA DEL TEMA ,ALGUIEN TIENE ALGUN ENLACE A DOCUMENTACION SOBRE ESTO??
GRACIAS A TODOS...Y FELICES FIESTAS...
Inseminacion artificial y cultivo in vitro de orquideas
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hace algunos meses publicaron sobre este tema, como haria para encontrarlo, o cualquier otra informacion que posean gracias
Interesados en in-vitro: glovebox casera
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Muy buenas a todos! Os dejo un enlace de como construir una glovebos casera o lo que es lo mismo una camara de flujo laminar. Encontre la web mientras investigaba sobre el tema in-vitro que desarrollo Monsterra ¡ vaya crack! espero que os guste y sobretodo que os sea util
saludos
Kit pasta reiki, semillas, agar y esterilización de semillas (fotos)
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Hola, como ya dije, ya esta abierta
Pues bien, el día 24 de Junio de 2014 a las 22:00 h. voy hacer un sorteo entre todos los que os registréis como clientes ( Para registrarse, no es necesario comprar) en . Publicare el nombre del agraciado en la pagina de Facebook de ORQUIDEAS ALMERIA, por lo que para saber el ganador debéis solicitar amistad a través de Facebook.
Condiciones:
- Se puede registrar todo aquel que quiera, pero solo se hará el envío en península ( España y Portugal ) y Baleares.
- Si el agraciado es de fuera de donde he dicho en el punto anterior, deberá cederlo a alguien que este dentro de ese rango.
- Contenido del premio:
Kit pasta Keiki
Porción de semillas (3 especies )
Kit de esterilización de semillas
Lo necesario para hacer 1 litro de medio casero ( Agar-agar y vitamina B1, el resto de componentes: azúcar, agua destilada y plátano o tomate , ya los ponéis vosotros)
6 contenedores de 280 ml ( para que hagáis 2 cultivos con cada especie)
2 contenedores de cristal de 25 m.l ( para pequeño cultivo de muestra)
1 macetero de Epiweb + 50 gr de sphagum
1 bolsa de 10gr de Epiweb moss mix
1 trozo de hidroglon de 20x20
PORTE GRATIS
Creo que el regalo es bastante completo y representativo de la tienda.
Si estáis en otras paginas de jardinería o conocéis a alguien que le interese, pasar el mensaje.
Muchas gracias a todos y SUERTE.
Manual de micropropagacion de orquídeas en este enlace
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Hola, Buen Dia.
A todos los entusiastas de la propagacion de orquideas in vitro les comparto este link que está maravilloso. Es un manual que contiene a detalle tooooodo lo que se necesita saber para propagar orquideas in vitro, como preparar las soluciones y los medios de cultivo, que medios son mejores para cultivo de tejidos, cuales para germinacion, bueno, que les puedo decir. Disfrutenlo.
El link es:
Manual de reproduccion in vitro orquídeas (documento en pdf)
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En esta direccion les dejo un manual bien completo de reproduccion in vitro con varios metodos, saludos a todos.
https://www.ceiba.org/documents/CFTCpropman(SP).pdf
Manual in vitro grancanariaweb.com
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Manual para la germinacion in vitro de las orquideas
La biología de la germinación de semillas de orquídeas Las semillas de orquídeas son conocidas usualmente como semillas de polvo porque son minúsculas y contienen pocas reservas de alimento. Usualmente estas semillas
no germinan en el medio natural a menos que sean infectadas por un hongo micorriza, el mismo que abastece a las plantas jóvenes con azúcares y nutrientes que necesitan hasta que sean lo suficientemente grandes para fabricar su propio alimento. Cuando la semilla germina produce una masa indiferenciada de células llamada protocormo
(figura 1). Manteniendo las condiciones normales, el protocormo continuará su crecimiento por varias semanas, meses o incluso años dependiendo de la especie hasta que alcance la edad apropiada para producir raíces y hojas. En el caso de orquídeas terrestres, es de vital importancia que la relación orquídea-hongo se conserve durante los estados tempranos del ciclo de vida de la planta ya que el protocormo enterrado no puede fabricar alimento por sí mismo. Por otro lado, los protocormos de las orquídeas epífitas son comúnmente verdes, lo que les posibilita
producir parte de su alimento. La relación orquídea-hongo no ha sido en su totalidad investigada para el caso de las orquídeas tropicales.
Fundamentos de la Germinación In Vitro
Germinación Simbiótica y no Simbiótica de Semillas
Mediante la germinación in vitro, se reproducen semillas en frascos de vidrio o plástico sobre un medio de agar nutritivo que contiene los azúcares y minerales necesarios para que las semillas germinen y crezcan. Hay dos tipos básicos de germinación in vitro: simbiótica y no simbiótica.
En la germinación simbiótica, las semillas se siembran con una pequeña porción del hongo micorriza apropiado. El hongo crece en el medio, coloniza a las semillas en proceso de germinación y se origina una relación simbiótica que se espera alimente al protocormo hasta que éste produzca hojas y se vuelva autotrófico. Esta técnica es
ampliamente usada para la propagación de orquídeas terrestres en zonas templadas. Tiene la ventaja de usar un medio simple (uno de los más comúnmente usados consiste en avena en polvo con una pequeña cantidad de extracto de levadura), y como resultado las plantas micorrizales suelen ser más fuertes y resistentes a infecciones que sus contrapartes cultivadas asimbióticamente. Sin embargo, la desventaja es que se necesita seleccionar el tipo de hongo micorriza adecuado para que se origine la simbiosis y prevenir parasitismo y la consecuente muerte de las
semillas. Se ha realizado poca investigación sobre la relación del hongo micorriza con las orquídeas tropicales, y por lo tanto no se dispone del hongo micorriza apropiado.
La germinación asimbiótica es usualmente usada en la propagación de orquídeas tropicales, las mismas que tienden a crecer fácilmente en comparación con sus parientes en zonas templadas. El medio usado para la germinación asimbiótica es más complejo que para la germinación simbiótica, ya que todos los nutrientes orgánicos e inorgánicos y los azúcares deben estar disponibles para la orquídea en una forma apropiada puesto que ya no existe la intermediación del hongo. La germinación asimbiótica es un método empleado actualmente . En caso de disponer
del hongo a partir de siembras in situ, habría la posibilidad de usar técnicas simbióticas en el futuro.
Fundamentos para mantener condiciones de esterilización
Tanto para la germinación simbiótica y asimbiótica es de vital importancia que el medio, los frascos, los aparatos y las semillas se mantengan desinfectadas desde el principio del proceso de germinación. Cualquier bacteria u hongo que se introduzca en los frascos crecerá más rápido que las semillas y pronto ocupará su espacio hasta matarlas.
Las condiciones de esterilización en la preparación del medio se crean autoclave el medio y los frascos a utilizarse por 15 minutos a 15 atm. Esta temperatura y presión son suficientes para matar todas las esporas de bacterias y hongos presentes en el medio.
Las semillas deben ser esterilizadas y transferidas a los frascos sin introducir hongos o bacterias externos. Generalmente, este proceso se realiza sembrando desde la superficie desinfectada de cápsulas verdes, o desinfectando semillas maduras con hipoclorito de sodio o calcio, o peróxido de hidrógeno. Además de asegurarse que todos los instrumentos utilizados en la transferencia estén desinfectados. Con cierto cuidado y práctica se puede crear y mantener condiciones de esterilización desde la germinación hasta el transplante de las semillas.
La esterilización consiste en vaciar el medio y sembrar las semillas utilizando una cámara de flujo laminar. Otras técnicas para mantener estas condiciones de esterilización son posibles (Thompson 1980), sin embargo son técnicamente más complicadas y no deben ser desarrolladas en condiciones húmedas y sin limpieza adecuada.
Uso de la cámara de flujo laminar
Se debe prestar atención a ciertas reglas básicas al usar la cámara de flujo laminar:
1. Siempre se la debe desinfectar por completo usando alcohol de 70-90% de concentración (de preferencia etanol, tener mucho cuidado si se utiliza alcohol antiséptico que contiene también metanol. El metanol es tóxico y puede causar ceguera si es ingerido). Use un roceador y limpie todas las superficies de la cámara con un algodón empapado de alcohol (incluyendo las paredes y el techo). Se debe desinfectar tanto antes como después de utilizar la cámara. Tenga cuidado de no inhalar cuando se rocee el etanol para utilizar la cámara.
2. Todo lo que ingresará en la cámara debe estar esterilizado. Utilice guantes y desinféctelos completamente antes de usarlos, roceándo alcohol y guardándolos en la cámara hasta que el alcohol se haya secado. Con práctica, es posible en lugar de usar guantes, lavarse las manos y fregarse las uñas usando un jabón antibacterial, secarse y esterilizar con alcohol, sin embargo en caso de que existieran problemas con contaminación bacterial se debe volver a utilizar los guantes. Use un mandil de laboratorio y lávelo constantemente. Asegúrese que los frascos de vidrio estén limpios. Los frascos de vidrio pueden ser roceados con alcohol al introducirlos en la cámara, pero con precaución.
Cualquier nota escrita con marcador sobre el vidrio será borrada por el etanol. Si los frascos están limpios, rocearlos con etanol no será necesario. Los instrumentos pueden ser autoclavados antes de su uso, envolviéndolos previamente en papel de aluminio o papel de empaque café sellado con cinta adhesiva. Una vez en la cámara, la esterilización es asegurada sumergiéndola en etanol al 100% y encendiéndola tres veces antes de usarla. La mejor manera de conservar el etanol es en frascos grandes de vidrio para permitir la máxima exposición de los instrumentos al etanol. Después de flamear los instrumentos éstos deben ser ubicados rápidamente sobre un frasco de vidrio esterilizado para continuar con el flameado. Déjelos enfriar antes de su uso.
3. Recuerde que cualquier espora de bacteria u hongo dentro de la cámara flotará hacia el interior y en dirección a su persona. Nunca ponga las manos, mangas u otro objeto sobre o en dirección de algo desinfectado (como el medio). Mantenga movimientos leves y evite crear turbulencia de aire que pueda ocasionar contaminación. No hable, tosa o esturnede dentro de la cámara. Trabaje en lo posible por la parte de atrás de la cámara y minimice el tiempo de exposición de los medios cuando sea posible.
4. Mantenga las condiciones de esterilización mediante la limpieza regular de la cámara con alcohol, desinfecte nuevamente los instrumentos luego de su uso y lávese de nuevo las manos después de haber tenido contacto con cualquier objeto fuera de la cámara. De manera especial, no se toque el cabello o la cara con los guantes puestos.
AVISOS DE PRECAUCIÓN
1. TENGA CUIDADO DE NO QUEMAR SUS MANOS - particularmente cuando use guantes! Es fácil hacerlo ya que Usted no puede sentir si el alcohol de los guantes se ha evaporado por completo. Ventajosamente el etanol se quema a una baja temperatura y puede ser fácilmente alejado si se agita con fuerza.
2. TENGA CUIDADO DE NO QUEMARSE - o quemar las semillas que se están transfiriendo de un sitio a otro - los instrumentos a utilizar se calientan altamente luego de dos encendidas.
3. RECUERDE SIEMPRE DE APAGAR EL GAS - tanto en el mechero para encender el fuego como en la parte superior del cilindro de gas.
2 PREPARACION DEL MEDIO
Introducción a la Preparación del Medio
El medio puede ser preparado ya sea utilizando ingredientes básicos (Thompson, 1977, Apéndice 1) o comprarlo en polvo a sus proveedores. Hay diferentes tipos de medios disponibles para la venta así como otros específicos para ciertas especies diseñados por expertos profesionales. Cuando se inicia el proceso de germinación de una nueva especie es aconsejable probar con diferentes medios a una concentración total y parcial para determinar cuál es el mejor medio para dicha especie. Por ejemplo, el género Masdevallias es conocido como un género "escogedor" del medio sobre el cual se va a desarrollar .El nivel de pH es también importante. La mayoría de orquídeas germinan en un medio de pH 5.5, sin embargo, especies andinas prefieren niveles más altos de pH, 5.6 al 5.9 . Al experimentar con el pH se debe considerar que el pH del medio será más alto luego de añadir el agar que antes de hacerlo.
El método general para la preparación de estos medios es el que se detalla a continuación.
Método general para la preparación del medio
1. Medir la cantidad correcta del medio en polvo utilizando una botella de 1 litro y evitando el contacto con el polvo del ambiente.
2. Sólo para Murashige y Skoog: añadir la cantidad correcta de azúcar y 2 gr/l de carbón activado.
3. Añadir una barra magnética y una pequeña cantidad de agua destilada y mezclar hasta que se disuelva.
4. Llenar el envase con agua destilada hasta tener 1 litro y agite continuamente.
5. Medir el pH y ajustarlo a 5.6 usando HCl o NaOH y mezclando completamente con la barra magnética. *Precaución: si se usa un medidor de pH no se debe mezclar el medio si se encuentra dentro el pHmetro: la membrana es muy delicada y costosa y puede romperse fácilmente. Si no se dispone del medidor de pH, los papeles
indicadores de pH son suficientes.
6. Verter la mitad del líquido en un frasco, añadir 4 gramos de agar a cada recipiente ( 8 gr/l de agar) y mezclar para que se disperse.
7. Cerrar la tapa de la botella sin asegurarla totalmente, cubrir los frascos con papel aluminio y llevarlos al autoclavado.
En condiciones ideales el medio debe preparse en una botella con la barra magnética durante todo el proceso de autoclave, con el fin de que el medio sea mezclado antes de verterlo en los frascos, logrando una mejor distribución del carbón activado en los mismos. Sin embargo, por razones de seguridad se prefiere usar dos botellas o frascos de 500 ml para de esta manera mantener la barra magnética en la botella y agitar suavemente antes de verter para dispersar el carbón activado.
AVISOS DE PRECAUCIÓN
1. NO RESPIRE EL PHYTAMAX EN POLVO Y EVITE EL CONTACTO CON LA PIEL
Y LOS OJOS. Si Usted tiene contacto con el polvo del Phytamax, Murashige y Skoog, o el carbón activado, debe lavarse inmediatamente la parte afectada con bastante agua fría. Si el contacto es con los ojos, láveselos inmediatamente con agua fría y solicite atención médica.
2. NUNCA CIERRE HERMÉTICAMENTE LA TAPA DEL FRASCO O BOTELLA ANTES DE PONERLA EN LA AUTOCLAVE. El elevado aumento de presión en la autoclave provocará que el frasco o botella explote. Siempre cerciórese de que las tapas estén flojas al poner los frascos en la autoclave: se las puede cerrar fuertemente una vez que los frascos se enfríen.
3. TENGA CUIDADO AL SACAR LOS FRASCOS Y BOTELLAS DEL AUTOCLAVE.
Estarán bastante calientes y Usted puede sufrir quemaduras.
Traspaso del Medio (verter en los frascos)
Para verter el medio en los frascos o cajas petri esterilizadas, se debe usar la cámara de flujo laminar (vea el literal Los frascos deben ser jabonados y lavados completamente cuatro veces antes de usarlos, y desinfectados por 15 minutos a 15 p.s.i. en la autoclave. Si tiene frascos con tapa, recuerde de cerrarlas totalmente antes de meterlas en la autoclave. Si no se tiene tapas disponibles, se puede cubrir los frascos con un pedazo de papel de aluminio. También se puede usar papel de empaque café sellado con una cuerda, pero es más inadecuado. Se debe repetir la
esterilización de los frascos que salgan de la autoclave con huecos en el papel aluminio o sin el papel aluminio.
1. Espere que el medio se enfríe lo suficiente para cogerle con las manos. Cuando el agar esté menos líquido y la botella o frasco no esté tan caliente, se puede verter el medio. Si se vierte el agar muy caliente se puede ocasionar una alta condensación.
2. Ponga en línea los frascos o cajas petri comenzando desde el fondo de la cámara de flujo laminar, aflojando las tapas de los frascos.
3. Saque las tapas de los frascos o cajas petri y vierte el agar moviendo de izquierda a derecha (si es diestro) para evitar que cualquier parte de la mano o del mandil de laboratorio roce con un frasco o caja abierta.
4. Deje que se asiente el medio y ponga de nuevo las tapas. Se puede tapar los frascos inmediatamente luego de que se ha vertido el medio, pero se puede provocar condensación. El agua sobrante en los frascos puede o no ser útil
dependiendo de la madurez de las semillas. La preparación completa del medio desde la mezcla de los ingredientes hasta el asentamiento del medio vertido tiene un tiempo estimado de 4 horas de duración. Si se ha preparado 2 litros de medio se puede utilizar una estufa para mantener la una botella caliente hasta terminar de utilizar la otra. La estufa caliente debe ser usada solamente por lapzos cortos de tiempo (emergencias), ya que en caso de períodos
más prolongados (como una media hora) se provocará la precipitación del carbón activado.
SIEMBRA DE LAS SEMILLAS
Colección y Almacenamiento de las Semillas
Las semillas pueden ser colectadas a partir de cápsulas verdes o cápsulas maduras. Una cápsula verde que está madurando, y está lista para ser sembrada, se encuentra llena de semillas y no se deforma cuando se la aprieta con las pinzas, "queda intacta". Las cápsulas pueden ser almacenadas por algunas semanas si se las envuelve en
papel de cocina y si se las coloca en un lugar del refrigerador con bastante aireación (como el compartimiento para el queso). No se debe almacenar las semillas en fundas plásticas ya que las cápsulas sudarán y se podrirán.
Si es posible, es mejor colectar cápsulas que han estado expuestas a un día seco. Es aconsejable usar semillas frescas o secadas en una solución saturada de hexahidrato de calcio (Seaton & Pitchard, 19xx). Si este compuesto no está a la disposición, se las puede secar con clorito de calcio, sílica gel (más áspero que el clorito de calcio y
solamente recomendado para usarlo a corto plazo) o simplemente dejarlas secar a la temperatura ambiente en una habitación (sólo en climas secos). Una vez que las semillas estén secas, se las puede almacenar por muchos meses en frascos cerrados dentro de un refrigerador (4-5°C). De nuevo, las semillas nunca deben ser almacenadas o transportadas en fundas plásticas o recipientes con aire encerrado. El tiempo desde el florecimiento hasta la maduración de las semillas varía significativamente de acuerdo a la especie y el lugar. Por ejemplo, las semillas de
Epidendrum o Masdevallia requieren aproximadamente de 3.5 meses para madurar mientras que las semillas de
Odontoglossum requieren alrededor de 18 meses. Las estimaciones convencionales no toman en cuenta las diferencias climáticas; de hecho una cápsula que crece en un recipiente de vidrio caliente madurará mucho más rápido que una creciendo en el bosque nublado.
Siembra de las Semillas
Cápsulas verdes vs. semillas secas
Se puede sembrar semillas a partir de cápsulas verdes o a partir de semillas secas. A continuación se describen las ventajas y desventajas de ambos métodos:
1. Siembra a partir de cápsulas verdes. El interior de las cápsulas de orquídeas se mantiene estéril si las cápsulas están intactas. Entonces, si se esteriliza la parte exterior de las mismas, donde hongos y bacterias pueden desarrollarse, y se abre las cápsulas bajo condiciones de esterilización las semillas podrán mantenerse
desinfectadas. La ventaja de este método es que no se requiere de la esterilización de las semillas, lo que podría provocar su deterioro. Además, algunas semillas tomadas de cápsulas casi maduras podrían germinar más rápido que las provenientes de cápsulas maduras a causa de los mecanismos de dormancia. La desventaja de este método es que al abrir la cápsula todas las semillas en ella deben ser utilizadas o eliminadas (algunas semillas maduras podrían secarse y ser almacenadas). También se debe considerar que las semillas sembradas a partir de
cápsulas que no han madurado lo suficiente podrían germinar lentamente o simplemente no germinar.
2. Siembra a partir de semillas secas. Una vez que la cápsula es abierta, las semillas dejan de ser estériles y requieren de un proceso de esterilización. Comúnmente, se utiliza una solución de hipoclorito (cloro) de sodio, hipoclorito de calcio o peróxido de hidrógeno. Las semillas se agitan dentro de la solución que además contiene
una gota de detergente para "humedecerlas", luego se las enjuaga con agua destilada y se las siembra en el medio preparado. La ventaja de este método es que las semillas pueden ser colectadas, secadas al aire, almacenadas por varios meses en el refrigerador y utilizadas cuando sea necesario. Se debe considerar que lo que se siembra está determinado por la disposición de cualquiera de las dos formas de encontrar las semillas de acuerdo a la época en que se cosechan.
Siembra a partir de cápsulas verdes
El método general para sembrar semillas a partir de cápsulas verdes es el siguiente:
1. Con la ayuda de un bisturí, remueva cuidadosamente la flor muerta de la cápsula
2. Utilice un cepillo de dientes suave para fregar suavemente la cápsula con la solución jabonosa.
3. Enjuage la cápsula en agua.
4. Introduzca la cápsula por 10 minutos aproximadamente en una solución de hipoclorito de sodio al 1% a la que se ha añadido una gota de detergente (tome en cuenta que el cloro común es hipoclorito de sodio al 5% por lo tanto hay que diluir lo necesario).
5. Transfiera la cápsula sumergida en la solución de cloro a la cámara de flujo laminar.
6. Saque la cápsula de la solución de cloro usando unas pinzas y tomándola preferiblemente de lo que queda del peciolo. Luego sumérjala en alcohol al 100% y pásela rápidamente por el fuego (flamear). Deje que el alcohol se queme completamente y que la cápsula y las pinzas se enfríen. Repita el proceso dos veces para las cápsulas grandes. Para el caso de las cápsulas pequeñas y frágiles decida Usted con discreción el tiempo de pasarlas por la llama (tal vez sólo una vez). Si no es posible sostenerlas del peciolo, cambie la posición de las pinzas antes de flamearlas nuevamente.
7. Transfiera la cápsula a una superficie desinfectada (como una caja petri esterilizada). Corte longitudinalmente la cápsula en la mitad con la ayuda de un bisturí desinfectado. Utilice una hoja de bisturí nueva para cada cápsula para
prevenir la propagación de virus.
8. Levante la una mitad de la cápsula con las pinzas y golpéela ligeramente sobre el medio para discernir las semillas.
9. Repetir este paso hasta que todas las semillas faltantes se utilicen. Las semillas menos maduras se pueden extraer de la cápsula con las pinzas.
10. Normalmente se añaden unas gotas de agua en cada frasco de modo que ciertos grupos de semillas se separen y se distribuyan sobre el agar.
Siembra a partir de cápsulas dehiscentes (abiertas con semillas secas)
Existen diferentes métodos para la siembra a partir de semillas secas. Todos ellos se basan en la esterilización de las semillas y el lavado en agua destilada antes de sembrarlas, pero las técnicas varían. El tiempo de esterilización también varía dependiendo de la especie, del tiempo de maduración luego que la semilla es colectada, de las condiciones climáticas a momento de la colección y de los métodos de secado y almacenamiento. Por ello, un rango de tiempos de esterilización es recomendado para las nuevas semillas.
Se usa usa principalmente dos técnicas para sembrar semillas maduras: el método de la jeringuilla y el método del paquete (o funda de papel). Es posible usar otras técnicas, como el método de filtración usando el embudo de Buchner, pero no están incluidas en este manual.
Tanto para el método de la jeringuilla como para el método del paquete es aconsejable esterilizar los instrumentos y el agua necesarios el día anterior, ya que el agua demora bastante en enfriarse luego del autoclavado.
En general, la técnica de la jeringuilla es usada para la mayoría de las semillas mientras que la técnica del paquete es utilizada para semillas más raras y pequeñas.
Método de la Jeringuilla
1. Tome una jeringuilla de 5 ml, tape la punta de la jeringuilla con un trozo de algodón envuelto en un pedazo de tela de media nylon (vea el diagrama), inserte el émbolo nuevamente y autoclave. Al mismo tiempo, autoclave una cierta cantidad de agua destilada (en frascos o botellas) y las pinzas.
2. Saque el émbolo de la jeringuilla y vierta una pequeña cantidad de semillas en la jeringa. (Una gran cantidad de semillas formará una masa en forma de pasta si se usa la técnica 5b para la siembra, haciendo difícil la siembra apropiada). Inserte de nuevo el émbolo.
3. Absorber con la jeringuilla 4 ml de la solución de cloro al 1% (a la que se le añadió una gota de detergente). Agite la jeringa por 5 minutos (u otro tiempo de esterilización), asegúrese de que las semillas se mojen completamente en la solución y que no queden atrapadas en burbujas de aire. Expulse esta solución y absorba de nuevo otra porción de solución fresca. Agite por otros 5 minutos y vuelva a expulsarla.
4. Lave las semillas 3-4 veces absorbiendo agua destilada y esterilizada en la jeringuilla, agitando por un momento y luego expulsando el líquido.
5. Siembre las semillas ya sea a) esterilizando el cuello de la jeringuilla, vertiendo las semillas en el medio y eliminando el exceso de agua o b) expulsando todo el exceso de agua, sacando el algodón con unas pinzas y colocando las semillas sobre el medio.
Método del Paquete (o funda de papel)
1. Elabore un paquete a partir de un pedazo de papel
2. Esparza una pequeña cantidad de semillas dentro de los paquetes. Nuevamente, cantidades grandes de semillas provocará que se junten e impidan la penetración del cloro.
3. Doble y selle los paquetes usando grapas. Sumérjalos en agua destilada por 5-10 minutos, apretando suavemente para dispersar cualquier burbuja de aire.
4. Con la ayuda de pinzas, transfiera los paquetes a la solución de cloro al 1% y que además contiene una gota de detergente. Déjeles en la solución por 10 minutos (u otro tiempo de esterilización), agitándoles continuamente.
5. Transfiera el paquete más el cloro a la cámara de flujo laminar. Usando pinzas traspase el paquete a agua destilada (en un frasco). Agite. Repite este procedimiento 3-4 veces para enjuagar las semillas.
6. Exprima suavemente los paquetes para eliminar el exceso de agua y transfiéralos a una superficie esterilizada. Corte y abra el paquete usando tijeras desinfectadas y siembre las semillas en el medio. Normalmente, al emplear esta técnica se ponen los paquetes en un recipiente que contenga cloro y éste sobre una placa magnética. De acuerdo con la teoría, las grapas actuarán como campos magnéticos y agitarán los paquetes automáticamente. Esto
nunca ha funcionado en mi experiencia personal. Tan sólo agitando los paquetes frecuentemente se obtienen los mismos resultados, y al sumergir al mismo tiempo varios paquetes en cloro se puede acelerar el proceso de siembra.
Cobertura de los Frascos
Después de la siembra los frascos pueden taparse ya sea usando "cling-film" o papel celofán cortado de las bolsas transparentes para hornear. Si se utiliza "cling-film", el film debe estar desenrollado en la cámara de flujo, doblado el un lado sobre el otro, y el lado más cercano a la parte posterior de la cámara es el que debe colocarse sobre los
frascos. Luego, se asegura el cling-film con una cinta elástica y se desprende el rollo sobrante.
Se corta el papel celofán en cuadrados, y se los autoclava dentro de los frascos cerrados antes de ser usados. El cuadrando de celofán se retira de los frascos usando las pinzas, se lo coloca sobre el frasco que contiene el medio y se lo asegura usando una cinta elástica. De las bolsas transparentes para hornear KLAR 2000 se puede obtener 20 cuadrados por bolsa y 160 cuadrados por paquete (8 bolsas por paquete). El papel celofán es más fácil de manejar que el cling-film y es reusable. Por lo tanto es recomendado para usarlo como material de cobertura.
Mantenimiento de Registros
Los registros deben mantenerse tanto en un cuaderno de laboratorio y un sistema de tarjetas como en el computador. Los detalles acerca del medio preparado, el proceso de siembra y las notas observadas se deben registrar en el cuaderno. En el sistema de tarjetas se registran todos los sembríos, asignando un código para cada uno, el mismo que consiste en el código de la especie (por ejemplo TF = Trichopilia fragrans ) más el código de siembra (por ejemplo TF12 si es el décimo segundo sembrío de Trichopilia). La fecha en que se hizo la siembra se coloca en la esquina superior izquierda de la tarjeta, y abajo de la fecha se coloca el número de frascos, tipo de
medio (y la fecha en que se preparó si se la recuerda), el código y fuente de la semilla y cualquier otra observación durante el proceso de siembra. Los frascos son examinados semanalmente y se debe registrar cualquier nota sobre contaminación y germinación con la fecha correspondiente. Si un frasco es eliminado se lo debe marcar con una X en alguna parte visible y se debe registrar la causa (por ejemplo, contaminación por hongos o bacterias). Si todas los frascos de una siembra particular han sido eliminados, se debe señalar con una X a lado del código de la especie y con una X grande en toda la tarjeta. La tarjeta no debe ser desechada, puede servir posteriormente para analizar las causas del problema.
Cada frasco tiene una etiqueta con el código de siembra y cualquier otra información relevante y útil para tenerla en un acceso fácil y no tener que recurrir a las tarjetas, como es el tiempo de esterilización. Cada frasco está también etiquetado con un código simple en el momento de verter el medio, con la finalidad de prevenir cualquier confusión durante el almacenamiento o la siembra.
CUIDADO DE LAS PLÁNTULAS.
Las semillas en los frascos.
Las semillas en la USFQ crecen 40 cm bajo tubos fluorescentes de 20 watts en un cuarto de crecimiento que está regulado a 18°C con 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad.
Los frascos recientes deben ser revisados regularmente luego de la siembra por el riesgo de contaminación. Si la contaminación es detectada lo más temprano posible, se la puede combatir antes de que se disperse totalmente. Sin embargo, una vez que el hongo ha producido esporas, o si existe poco líquido en el fondo del frasco, no es aconsejable combatir dicha contaminación. En casos como éste, se debe eliminar el frasco. De manera ocasional, una contaminación de hongos podría motivar la germinación . En este último caso, se puede dejar que las semillas crezcan, pero deben ser transplantadas antes que el hongo ocupe su espacio y las destruya.
Agua destilada puede ser añadida si los frascos están secos, usando una jeringuilla desinfectada.
Las pequeñas plantas son transplantadas cuando empiezan a aparecer hojas y empiezan a llenar el frasco. La excepción a esta regla se da cuando es más eficaz remover los protocormos de un frasco o caja petri contaminada. Las plántulas se transfieren a nuevos frascos que contienen el medio usando pinzas desinfectadas.
Una aguja de crochet es útil en esta fase para retirar semillas delicadas .
El siguiente medio puede ser el mismo que el primero, pero usualmente es mejor si se añade al nuevo medio sustancias complejas (como plátano aplastado, leche de coco, jugo de piña o vitamina B) para fomentar el
desarrollo de la raíz . Se puede hacer un hueco pequeño en las tapas (si son de metal o plástico, posiblemente en el celofán y no aconsejable en el cling-film) y sellarlo dos o tres veces con el microporo para proporcionar una superficie de respiración a prueba de esporas en las tapas.
Se debe realizar algunos transplantes antes de que las plantas estén listas para ser plantadas en una maceta.
Transplante
En los frascos las plántulas se han desarrollado en un ambiente cerrado y limpio por lo que deben acostumbrarse gradualmente al ambiente externo antes de ser transplantadas a las masetas. En el cuarto de crecimiento, la luz es baja y tanto la luz como la temperatura son prácticamente constantes. La humedad en los frascos es alta y las plantas están protegidas de ataques de hongos, bacterias y herbívoros. En el medio natural , ambas temperatura y luz varían constantemente. Las nuevas plantas deben estar protegidas de manera especial de la fuerte luz solar: incluso una pequeña cantidad de luz solar podría quemar las hojas de estas plantas que usualmente crecen en la sombra. Además, las plántulas que han crecido en condiciones de alta humedad tendrán cutículas débiles por lo que necesitan acostumbrarse gradualmente a medios más secos antes de ser transplantadas. Finalmente, tanto en la fase de aclimatación como en la de transplante, las plántulas deben ser cuidadas diariamente para evitar problemas, y más que una vez al día si el clima es seco y muy soleado. A continuación se detallan algunos consejos para el transplante. El tiempo de duración de cada fase puede variar con respecto al especificado: el monitoreo constante debería dar una idea de lo más apropiado para cada especie bajo ciertas condiciones. Modifique estos pasos cuando sea necesario.
1. Si es posible empiece la fase de transplante al inicio de un período lluvioso. Los bajos niveles de luz y la alta humedad en esta época ayudaría a que las semillas se aclimaticen y se establezcan. (Sin embargo hay que considerar que una elevada humedad podría fomentar un ataque de hongos cuando se plante en esta época)
2. Coloque los frascos en un lugar sombreado y protegido de la lluvia para que se aclimaticen a las nuevas condiciones de luz y temperatura. Déjelos por 2 a 4 semanas con las tapas puestas.
3. Afloje las tapas para permitir la entrada de pequeñas cantidades de aire. Déjelas así por 1 semana. Revise diariamente si existen hojas marchitas y asegúrese de que el medio esté húmedo pero no completamente mojado.
4. Abra los frascos un poco más. Déjelos por unos pocos días y revise diariamente.
5. Abra las tapas hasta la mitad de la abertura. Déjelas así por otros pocos días y revise diariamente.
6. Abra las tapas los tres cuartos. Déjelas así por otros pocos días y revise diariamente.
7. Abra completamente los frascos. Si es posible manténgalos abiertos por una semana antes de llevar las plántulas a transplantarlas en el criadero.
8. Escoja el medio correcto para plantar las pequeñas plantas. (ver el Apéndice)
9. Cuidadosamente retire las plantas de los frascos, apártelas suavemente y enjuage los residuos de agar.
10. Llene una maseta (base con agujeros) con compost y sumérjala en una fuente grande de agua. Humedezca las raíces de la planta con fungicida y plántala en el medio flotante.
11. Cuando la maseta sea retirada del agua, el medio debe adherirse a las raíces de las orquídeas sin destruírlas. Coloque las nuevas plántulas en la cámara de aclimatación o en una pequeña carpa de mesa hecha de plástico transparente para que asegure la alta humedad durante la fase de establecimiento. Rocear agua ayudará a mantener la humedad en las primeras fases.
12. De nuevo, aclimate gradualmente las plántulas al nuevo medio (por ejemplo carpa totalmente sellada, puerta de la carpa parcialmente abierta, puerta totalmente abierta, quitar la carpa pero proteger de la lluvia, quitar la protección de la lluvia; para ciertas especies probablemente se debería proteger todas las plantas bajo una cubierta de plástico) Cuando ya están aclimatadas y sean suficientemente grandes, pueden ser transplantadas a masetas más grandes o simplemente adheridas al tronco de un árbol, rama o pedazo de corteza (con o sin una almohadilla de musgo experimental) Rocee agua en las faces iniciales del desarrollo, juzque Usted mismo cuánta cantidad de agua y cuándo colocarla considerando que se debe evitar que la planta se reseque pero que no se debe propiciar el crecimiento de hongos.
CONCLUSION
Mediante la la germinación in vitro un mayor número de plantas pueden ser cultivadas en un período de tiempo relativamente menor (algunos meses para las especies más rápidas). Un grupo de estas semillas germinadas podrán ser exportadas fácilmente porque las orquídeas cultivadas y mantenidas en frascos esterilizados están excentas
de las usuales regulaciones CITES referentes a sanidad vegetal y vida silvestre. , plantadas en macetas y cultivadas ya sea para venta o para introducción en el bosque u otras áreas. Cada cápsula de orquídeas contiene muchos miles de semillas, lo que significa que se podrán admirar muchas plantas.
BIBLIOGRAFIA
Arditti, J. 1982. Orchid seed germination and seedling culture - A Manual. En J. Arditti(Ed.) Orchid biology: reviews and perspectives II
. Págs. 243-370. Cornell University Press, Londres. Pritchard, H.W. (Ed.) 1989.
Modern methods in orchid conservation: The role of physiology, ecology and management. Cambridge University Press, Cambridge.
Seaton, P. & Pritchard, H. 19xx. The do´s and don´ts of orchid seed storage. Thompson, P.A. 1980. Orchids from seed . HMSO, Londres.
APENDICE 1
Equipos y materiales usados para la germinación de semillas en la USFQ
Cámara de flujo laminar
Autoclave
Cuarto de crecimiento (18°C, 16 horas de luz, 8 horas de oscuridad)
Repisas con lámparas fluorescentes de 20 watts.
Botella de Pyrex de 1 litro
Frasco de Pyrex de 1 litro
Placa y barra magnética
Medidor de pH
NaOH y HCl para ajustar el pH
Agua destilada
Medio Phytamax para el cultivo de orquídeas (P6668, Químicos Sigma)
Sales Murashige y Skoolg (xxx)
Agar-Agar (Químicos Sigma)
Azúcar
Carbón activado
Vitamina Complejo B
Pinzas de varios tamaños
2 bisturís con hojas desechables
Botellas de vidrio para el etanol
Frascos de vidrio
Vasos plásticos de 250 ml
Cajas petri
Recipientes pequeños de vidrio para las semillas
Tapas para frascos
Mandil de laboratorio
Papel de aluminio
Toalla pequeña para manos
Papel empaque café
Guantes de cocina
Cinta adhesiva
Guantes plásticos desechables
Cling-film
Pedazos de tela
Bolsas de hornear (celofán)
Papel de cocina
Cintas elásticas
Microporo
Papel
Alcohol antiséptico (etanol al 70%)
Etanol al 100%
Roceador para el etanol
Marcadores indelebles (negro)
Cloro
Jeringuillas
Algodón
Medias nylon
Grapadora y grapas
Medio de cultivo
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Hola a tutti, reaparecido despues de casi un año pero aqui de nuevo. Una pregunta al foro, alguien sabe como y donde conseguir medio de cultivo para orquideas, ya sea Dyna o cualquier otro. Hace tiempo me conecte con el fabricante ingles pero me dieron ... y dijeron que solo vendian a profesionales. Asi estamos, tengo 2 capsulas una de una hibridazion de Phalaneopsis y otro de Coryantes pero sin medio para cultivas. Espro una ayudita.
Gracias a todos
Medio de cultivo in vitro
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hola disculparan por ser tan pregunton pero quiero saber si hay forma de sustituir el agar como aderente o usar otro metodo de cultivo para mis las semillas
Medio para germinar semillas de orquideas
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hola soy Elena Mari , amiga de Silvia Grillo, ella tiene la computadora descompuesta, me ha pedido puesto que soy la amiga, quien la puede orientar en un metodo casero DE MEDIO DE CULTIVO DE SEMILLAS DE ORQUIDEAS, SABE QUE ES DIFICIL PREO NO IMPOSIBLE.
por mi parte tengo dos semillas de ipomea alba, busque en los post y no encontre el paso apaso para hacer que me germinen QUIEN NOS PUEDE AYUDAR GRACIAS
Medios de cultivo para micropropagación in vitro: busco ingredientes
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estoy tratando de propagar yemas de vid, mediante varios metodos (del taper, camara humeda, etc) pero han fallado.
quisiera micropropagar mediante el metodo in vitro, pero necesito los "ingredientes" del medio de cultivo.
alguien quien sepa o hay trabajado en esto podria darme una manito!?
se lo agradeceria mucho
Medios de cultivos in vitro de orquídeas caseros
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hola quisiera informacion sobre medios utilizados para hacer in vitro, lo que pasa es que la verdad que usar metodos de laboratorio me sale carisimo y he escuchado que hay formulas caseras que dan hasta mejores resultados y abaratan los costos, necesito urgente algun experto o conocedor del tema
Mi primera experiencia en cultivo "in vitro"
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Hola, empiezo este hilo para ir mostrando los progresos (si los hay) de mi primer cultivo "in vitroâ€. Voy a trabajar en cámara de flujo.
Ya tengo una vaina gracias a Granucaverde (gracias Cati ) que has confiado en que seré capaz de sacar algo.
Me parece que está un poco verde (pero como es la primera que tengo en mis manos...), creo que va a tardar aún unos días en abrir así que la voy a esterilizar y a guardar.
Si en unos días me puede la impaciencia, a lo mejor la abro. Si no, esperare....
Como decís que hay miles de semillas dentro, voy a hacer varias pruebas y voy a guardar semillas estériles (por si acaso...).
Voy a usar dos medios:
1.- Knudson C preparado por mí y esterilizado por filtración (no hirviendo)
foto de los fltros
2.- y agar-patata-dextrosa, comercial, comprado estéril y listo para usar. Es el que se usa para cultivo de hongos con macroesporas y ambientales.
La vaina:
Se le da un baño, no de cloro (que me da más yuyu) sino con solución gelificada alcoholica deinfectante.
La envuelvo y... hasta que se evapora. Antes de que se seque ya está la vaina en la cámara de flujo.
Una vez seca, sesión de ultravioleta vuelta y vuelta. (el color de la foto es por los UV)
Con cuidado de no contaminar, reservo la vaina en un frasco estéril de cultivo tradicional.
Y.... a la cámara de cultivo a 26 grados, a ver si se abre sola.
Bueno, pues por ahora no he podido hacer más. Lo tengo todo listo para el siguiente paso.
Ya os dire cómo va.
Si a alguien se le ocurre algo, ve algo que está mal o puede aportar ideas, por favor; que me lo diga
Besos Mar
Upppss perdón, me olvido decir que es una vaina de Phal. Para saber detalles de sus papás.... a Granucaverde
Micropropagación invitro (clonación) o por semilla fertilización, fumigac
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Se agradecen los comentarios sobre las experiencias que tengan al respecto
Micropropagacion Pregunta de Principiante
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Buenas,
Hola soy nuevo, sin embargo los he seguido alrededor de 2 años, próximamente estaré tomando fotografías de mis jardines para compartirlas con Uds.
En vista que he logrado ya bastante con las plantas, he decidido complicarme un poco más y explorar el mundo de las orquídeas.
Actualmente tengo varias en mi colección, sin embargo me gustaría multiplicarlas por medio de micropropagación y en este caso vía semillas.
Me he informado en este foro de como realizar un ambiente estéril barato y casero, sin embargo, me gustaría, saber que experimentos puedo realizar para comprobar que puedo dominar el ambiente estéril en los frascos que contendrán en un futuro las semillas a germinar.
Con esto quiero preguntar, si es posible recrear los medios de cultivos y seguir al pie de la letra pero obviando insertar las semillas, y con ello comprobar si los medios de cultivo llegan a contaminarse o permanecen intactos.
Si no introduzco las semillas, en que determinado tiempo puedo corroborar que la esterilidad fue un éxito?
Necesito agar agar
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Hola a todos los colegas del foro.
Me preguntaba que si yo podria sustituir el Agar Agar por otra sustancia que me complemente la falta de este.
O si para hacer el sutracto de germinacion tiene que se con Agar Agar
Orquídea bebé en un frasquito con hojas moradas: ayuda
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Hola, soy nueva por aqui... tengo una orquidea es muy pequeñita, aun se encuentra encapsulada y cada tercer dia le hago un aguero al vaso que la cubre para que se adapte al medio ambiente... el punto es que dos de sus hojas, se esta poniendo morada-rojiza... no se si esto es normal o no
Espero contar con su ayuda
gracias
Orquídea in vitro
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Soy nuevo en esto de las orquideas, mi esposa me regalo una y deseo plantarla, pero no se nada de ellas, nada mas se que se usa peat moss ¿es correcto esto? ¿cual es la mejor temporada para plantarla? ¿puedo usar agua de la llave o es alguna especial?, etc, etc, etc.
Gracias a todos por su ayuda
Orquídeas germinadas in vitro he recibido (fotos)
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Hola queridos amigos!!!!!!!!
¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡Ya tengo plantitas bebés!!!!!!!!!!!
Me llegaron ayer de Canarias!!!!!! ...Un buen amigo me las envió.....¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡y estoy loca de contentaaaaaa!!!!!!.están tan lindas en los tubitos.y son tan tiernas y diminutas!!!!!!!!
¡¡¡¡¡Os las enseñooooooo!!!!!!!!!...Y ahora tndreis que ayudarme a sacarlas adelante....porque no tengo ninguna experiencia.......pero acepto el reto!!!!!...soy muy atrevida!!!!!!!!
De momento como son pequeñitas las dejaré ahí algún tiempo más....... ...creo.......
DENDROBIUM CRUMENATUM
DENDROBIUM HERCOGLOSSUM
PLEIONE MACULATA
¿¿¿¿¿¿¿¿Qué os parecen...?????????
Muchos besos!!!!!!!!!...y espero que me ayudeis a sacar a estas plantulitas adelanteeeeeeee!!!!!!!!!!!!!
Orquídeas in vitro
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Hola amigos del foro; Soy nuevo en este foro y queria ver si alguien me puede ayudar con algo de informacion, diciendome donde pudo conseguir orquideas in vitro vivo en México DF espero me puedan ayudar gracias y saludoa a todos.
Orquídeas in vitro
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Hola a todos!
este fin de semana estuve en una expo de orquideas y me senti muy tentada a comprar un frasco con plantines in vitro.
Finalmente no me anime porque eran costosos y tenia miedo de no tener exito con ellos.
Podrian contarme sus experiencias?
Gracias!!!
Orquídeas in vitro
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Hola:
He visto en algunos sitios que ofercen las orquideas In Vitro y mi pregunta es...¿Que tan facil es el que se logren estas plantas?
Se requiere de gran experiencia...yo soy totalmente neofito en las orquideas aunque muy aficionado a las plantas de toda mi vida.
Agradezco de antemano sus comentarios.
saludos desde México
Orquídeas in vitro
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Estoy pensando comprar un tarro con plantitas cuando vaya a la Expo de Madrid. No tengo ninguna experiencia con los tarros, así que si alguien me puede decir qué es lo que hay que tener en cuenta para estar seguro de la calidad de las plantitas estaría muy agradecido.
Orquídeas in vitro
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Estimados, soy nuevo en este tema de las orquideas y he estado buscando material bilbiografico sobre los cultivos in vitro y no encontre demaciado.
Por este motivo acudo a Udes. para solicitarles ayuda para que me inicien en mis primeros pasos.
Desde ya Muchas Gracias.
Omar
Orquídeas reproducir cultivo in vitro: ¿con qué especies empezar?
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Hola!!!
Soy un recién llegado al mundo de las orquídeas. Me gustaría realizar un cultivo in vitro con semillas; es por ello que me dirijo a todos vosotros para que aprovechándome sanamente de vuestra experiencia me recomendéis con qué especie puedo empezar así como dónde podría conseguir alguna semilla.... ah!!! también quisiera hacer la prueba a partir de meristemas... muchas gracias.
Orquídeas: cultivo in vitro y su aclimatación, pongo información
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Creo que ya va siendo hora de que dispongais todos los interesados de la información suficiente para ir tocando el cultivo in vitro y su aclimatación por lo que os paso una serie de páginas web con información abundante.
Un saludo:
Miguel Angel
P668 medio de cultivo: ¿cómo prepararlo?
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Hola,
después de tiempo vuelvo a escribir, acabo de recibir el medio de cultivo que compre hace tiempo en el internet, el problema es que no tengo idea de como debo prepararlo, ya que siempre lo prepare de tomate, ósea si debo agregar solo el agua destilada al sobre o que?
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1352913438h.jpg)
saludos JC
Página web con información sobre orquídeas in-vitro
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Hola a tod@s
he encontrado esta web que aunque esta en ingles y aleman creo es imprescincible visitarla ya que contiene explicaciones muy buenas y alguna documentacion interesantisima.....
Para quienes hacen in vitro!
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Hola!!! Muchos saludos!!!
Para uds., una pregunta:
Alguien me comento que utilizaba como método de verificación de viabilidad para semillas de orquídeas el método de flotación que se usa en otras semillas en general. Para mí es una sorpresa, porque si la memoria no me falla, cada vez que he hecho in-vitro, las semillas flotaban!!! Y de esas semillas he obtenido plantitas y/o embriones muy gorditos y verdes. Más seriamente en la literatura utilizan un microscópio, y simplemente observan los embriones, cosa que sólo para unas pocas especies se puede hacer con dificultad a simple vista...
La pregunta es, uds. lo usan? qué experiencias han tenido???
Yo pienso que éste no es precisamente el método adecuado para las orquídeas, pero como uno no termina jamás de aprender, pues simplemente quisiera remitirme a las experiencias de otras personas!!!
De antemano muchas gracias!!! saludos!!!
Planta cultivo in vitro
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buenas noches
soy nuevo en este foro, pido ayuda para que por favor me expliquen los tamaños de plantas de orquideas en frascos y cuales son los mas recomendados para los principiantes en el cultivo de las orquideas
Plantas in vitro de orquídeas: información sobre micropropagación
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Hola, soy un estudiante de ingeniero agrónomo de la Universidad Politécnica de Valencia. Estoy haciendo un trabajo el la asignatura de "Micropropagación" sobre la comparación entre la obtención de orquideas mediante el cultivo in vitro y otros metodos.
Me gustaría que me facilitarais información de medios de cultivos, condiciones, protocolo, metodología, etc; y también si me podeis dar algún link donde lo de todo bien explicado.
Se que es una información muy específica, pero cualquier ayuda sería muy interesante.
Muchas gracias por atenderme.
Un saludo.
Plántulas in vitro
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hola a todos resulta que me he comprado plantulas de cattleya maxima alba x semialba y me he dado cuenta que dentro del recipiente hay mucha sudoracion, eso afectara a las plantas?????, seria conveniente empezar el proceso de aclimtacion?????.
Plántulas in vitro
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¡Hola foreros!
Me han regalado varias orquídeas que vienen en tubos de ensayo, he leído que antes de plantarlas conviene darles un baño con fungicida, ¿alguien podría recomendarme algun fungicida que sea fácil de encontrar (en España)? Y si teneis algún otro consejillo será bienvenido.
¡GRACIAAAS!
Polinización natural y artificial: para interesados en propagación orquídeas in vitro
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Hola!!
bueno, en vista de que hay varias personas que estan interesadas en la propagacion de orquideas in-vitro, he buscado en mis apuntes y les tengo estos datos:
luego de la polinizacion natural o artificial que uno realiza, hay que esperar el crecimiento y maduracion de la capsula para poder "sembrar" las semillas, el porcentaje adecuado de madurez de una capsula es cuando esta se encuentra en un 60% de maduracion, cuando no ha ocurrido la dehiscencia (cuando no se ha abierto) esto es cuando empieza a cambiar de color verde a un color verde-amarillento.
Lo cual pasa, aproximadamente en:
Barkeria sp...........................100 días
Calanthe sp..........................120 días
Cattleya skinneri...................270 días
Cattleya aurantiaca...............120-140 días
Cymbidium sp.......................210-270 días
Dendrobium sp......................150 días
Epidendrum sp......................120 días
Laelia sp...............................120-170 días
Lycaste sp............................240-270 días
Miltonia sp............................110 días
Odontoglossum sp................210 días
Oncidium sp.........................120-210 días
Paphiopedilum sp..................300 dias!!!!
Phalaenopsis sp....................120 días
Stanhopea sp........................210 días
Vanda sp..............................180 días
bueno esos son los días que hay que esperar luego de la polinizacion para que la capsula este lista para la siembra, luego de la siembra hay que esperar mas o menos un mes para que las semillas germinen, y luego un poco mas de 2 meses para que se formen los protocormos, asi que compañeros mios, si quieren realizar propagacion in-vitro (QUE ES GENIAL, HAGANLO) tienen que esperar y esperar....
espero les sirva....
Saludos
Polinización y semillas para cultivo in vitro
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Hola a tod@s
Quiero proponer a todos y en especial a los que estais inmersos en el mundillo del in-vitro la creacion de un nuevo subforo para el intercambio de semillas de nuestras orquis que hallamos polinizado con exito y nos sobren.
para intercambiar con otros foreros que tengan otras orquis que nos interesen o simplemente para enviarlas a los que quieren provar el in-vitro y no han conseguido polinizar con exito sus orquis o lo quieren probar con orquis que no tienen.
Que hos parece, haber si asi se apunta mas gente a lo del in-vitro...
Por fin he terminado mi glovebox (cámara estéril para cultivo in vitro)
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![[Foto de planta, jardin, jardineria]](klz1221660636n.gif)
Hola chic@sDespués de tanto pensar y reúnir los materiales, por fin he terminado la cámara estéril para el cultivo in vitro. Éste es el resultado.
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1250625010i.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1250625042l.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1250625102v.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](rgh1250625138r.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1250624732x.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1250624761n.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bwy1250624791y.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](bfi1250624818y.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](viu1250624850y.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](cqs1250624876z.jpg)
![[Foto de planta, jardin, jardineria]](rgh1250624901s.jpg)
Ahora solo falta que me funcione...
Un saludo
Pregunta de in vitro
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Hola,
Alguien me puede decir si en el cultivo in vitro ha hecho agujero en la tapa de los frascos madre, para ventilar con filtro o no? si es mejor una cosa o la otra?
Un saludo,
Monstera
Preguntas sobre invitro.....
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HOLA REIMUNDO!!!! Y TODO EL MUNDO!!!! Bueno, aquí yo molestando de nuevo, pero para eso les pago, o no????? Respecto a las varas florales, se podrán hacer crecer mejor invitro, que con el sistema ese de las hormonas en las puntitas, etc? Suena loco? Qué opinan? Otra preguntilla...saben si de forma invitro puedo reproducir otras plantas, a partir de un pedacito? Cuáles me recomendarían?
Les cuento que estuve tratando de embarazar a casi todas las flores de mis orquídeas...o sea que me van a quedar pelonas dentro de poco...cuando se les caigan las flores ...sin embargo, hoy noté algo diferente en una de ellas: el agujerito por donde metí el polen no se ve...como si esa parte se hubiera doblado hacia adelante como envolviendo el agujero. La flor está perfectamente, las demás ya se están desmayando...será que la suerte de principiante estuvo de mi lado con esa flor? Es demasiado pronto para que el tallito tenga un cambio, pero eso que les dije sí es muy diferente de las otras.... Bueno, ya me salí por la tangente...para variar... Cuídense, Henny
Preparando el in vitro
(Leer más...)
Hola a todos, les cuento que despues de tanto tiempo al fin voy a realizar el cultivo invitro casero con algunas semillas de epidendrum que me mando Paraguayo y con semillas de prosthechea que tengo por ahi, ya tengo preparado los frascos con el medio como veran y solo esperar hasta la proxima semana (de paso veo si algun frasco esta contaminado) para realizar la siembra.